Бактерии группы кишечной палочки в мясе птицы
ГОСТ Р 54374-2011
Группа Н19
ОКС 67.120.20
ОКСТУ 9209
Дата введения 2012-07-01
Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ “О техническом регулировании”, а правила применения национальных стандартов Российской Федерации – ГОСТ Р 1.0-2004 “Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения”
Сведения о стандарте
1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии)
2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 116 “Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки”
3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 августа 2011 г. N 219-ст
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе “Национальные стандарты”, а текст изменений и поправок – в ежемесячно издаваемых информационных указателях “Национальные стандарты”. В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе “Национальные стандарты”. Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет
ВНЕСЕНА поправка, опубликованная в ИУС N 8, 2012 год
Поправка внесена изготовителем базы данных
1 Область применения
Настоящий стандарт распространяется на мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы, а также жир-сырец птицы (далее – продукт) и устанавливает методы наиболее вероятного числа, посева в/на агаризованные селективно-диагностические среды для выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia) (далее – колиформные бактерии).
2 Нормативные ссылки
В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ Р ИСО 7218-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям
ГОСТ Р ИСО 11133-1-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории
ГОСТ Р ИСО 11133-2-2008 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред
ГОСТ Р 50396.0-92 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям
ГОСТ Р 52816-2007 Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий)
ГОСТ Р 53597-2009 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Методы отбора проб и подготовка их к испытаниям
ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования
ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности
ГОСТ 12.1.019-79* Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 12.1.019-2009, здесь и далее по тексту. – Примечание изготовителя базы данных.
 
ГОСТ 10444.1-84 Консервы. Приготовление растворов реактивов, красок, индикаторов и питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе
ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов
ГОСТ 26670-91 Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов
ГОСТ 29184-91* Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae
________________
* На территории Российской Федерации документ не действует. Действует ГОСТ Р 54005-2010, здесь и далее по тексту. – Примечание изготовителя базы данных.
ГОСТ 30425-97 Консервы. Метод определения промышленной стерильности
Примечание – При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования – на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю “Национальные стандарты”, который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины, определения и сокращения
В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52816, а также следующие сокращения.
НВЧ – наиболее вероятное число;
КОЕ – колониеобразующие единицы;
БГКП – бактерии группы кишечных палочек.
4 Сущность методов
Метод выявления колиформных бактерий основан на высеве определенного количества продукта и (или) его разведения в жидкую среду с лактозой, термостатировании при температуре (37±1) °С в течение (48±2) ч, подтверждении принадлежности, при необходимости, выросших микроорганизмов по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам к колиформным бактериям.
Метод определения количества колиформных бактерий методом НВЧ основан на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в жидкую селективную среду с лактозой; термостатировании, учете положительных пробирок, подтверждении принадлежности, при необходимости, по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям. Метод определения наиболее вероятного числа колиформных бактерий предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта менее 150 или в 1 см жидкого продукта менее 15 клеток колиформных бактерий.
Методы определения количества колиформных бактерий основаны на высеве определенного количества продукта и (или) его последовательных разведений в/на агаризованную селективно-диагностическую среду с лактозой, термостатировании, подсчете типичных и атипичных колоний, подтверждении принадлежности по морфологическим, культуральным признакам и биохимическим свойствам выросших микроорганизмов к колиформным бактериям.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом в агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 150 или в 1 см жидкого продукта более 15 колониеобразующих единиц колиформных бактерий.
Метод определения количества колиформных бактерий посевом на агаризованные селективно-диагностические среды предназначен для проб, содержащих в 1 г твердого продукта более 1500 или в 1 см жидкого продукта более 150 колониеобразующих единиц колиформных бактерий.
5 Общие положения
5.1 Общие требования к проведению микробиологических исследований – по ГОСТ Р ИСО 7218.
5.2 Требования безопасности
Требования безопасности при работе с микроорганизмами – по ГОСТ Р ИСО 7218, с химическими реактивами – по ГОСТ 12.1.007, с электрооборудованием – по ГОСТ 12.1.019.
Требования пожарной безопасности – по ГОСТ 12.1.004.
5.3 Требования к персоналу – по ГОСТ Р ИСО 7218.
6 Средства измерений, аппаратура, материалы, культуральные среды и реактивы
6.1 Средства измерений, аппаратура, материалы, культуральные среды и реактивы – по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 53597, ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ Р 52816.
6.2 Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов, реактивов, по качеству не ниже указанных в 6.1.
7 Подготовка к проведению испытаний
7.1 Отбор и подготовка проб
Отбор и подготовка проб – по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 53597, ГОСТ Р ИСО 7218.
7.2 Приготовление разведений из пробы для анализа – по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ 26669.
7.3 Подготовка средств измерений, аппаратуры, оборудования, посуды и материалов – по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р ИСО 7218.
7.4 Подготовка и приготовление культуральных сред, растворов реактивов
Общие указания по приготовлению культуральных сред – по ГОСТ Р ИСО 11133-1.
7.4.1 Селективная обогатительная среда (лаурил сульфат триптозный бульон) по ГОСТ Р 52816.
7.4.2 Бульон лактозный с бриллиантовым зеленым и желчью по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 52816.
7.4.3 Селективная обогатительная среда (бульон Мак-Конки) по ГОСТ Р 52816.
7.4.4 Среда Кесслера с лактозой по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ Р 52816.
7.4.5 Среда Хейфица по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.6 Кристалл виолет нейтральный красный желчный лактозный агар (VRBL-агар) по ГОСТ Р 52816.
7.4.7 Агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным по ГОСТ Р 52816.
7.4.8 Среда Эндо по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.9 Среда Гисса с лактозой по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ 10444.1.
7.4.10 ГРМ-агар (сухой питательный агар на основе гидролизата рыбной муки для культивирования бактерий) по ГОСТ Р 52816.
7.4.11 Мясо-пептонный агар по ГОСТ Р 50396.0.
7.4.12 Реактивы для окраски по Граму по ГОСТ 10444.1.
7.4.13 Диски индикаторные бумажные для определения оксидазы.
7.4.14 Реактивы для теста Григорсена по ГОСТ Р 52816.
7.4.15 Допускается использование других культуральных селективно-диагностических сред, в том числе хромогенных, разрешенных и предназначенных для выявления и определения колиформных бактерий.
7.4.16 Приготовление и правила использования культуральных сред промышленного производства проводят по ГОСТ Р ИСО 11133-2.
7.4.17 Методы контроля культуральных сред – по ГОСТ Р ИСО 11133-1.
7.4.18 Сроки и условия хранения культуральных сред – по ГОСТ Р ИСО 11133-1.
8 Проведение испытаний
8.1 Метод выявления колиформных бактерий – по ГОСТ Р 52816 (подраздел 9.1).
8.1.1 Оценка и выражение результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
Пробирки с посевами, в которых отмечен рост микроорганизмов (помутнение среды), образование газа (наличие пузырьков газа в поплавках) и кислоты (изменение цвета среды), считают положительными, и обнаруженные микроорганизмы относятся к колиформным бактериям.
При выявлении колиформных бактерий отмечают присутствие или отсутствие их в г или в см продукта.
Результаты исследований записывают как “БГКП обнаружены или не обнаружены в г (см) продукта”.
8.1.2 Дополнительное подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям
8.1.2.1 Выделение чистой культуры на дифференциально-диагностических агаризованных средах и идентификация
При необходимости для дополнительного подтверждения принадлежности выявленных бактерий, выросших на жидких средах с образованием газа, к колиформным бактериям проводят пересевы для получения изолированных колоний по ГОСТ Р 50396.0, ГОСТ 26670 штрихом на поверхность одной из селективно-диагностических сред: VRDL-агар (см. 7.4.6), агар лактозный с бриллиантовым зеленым и феноловым красным (см. 7.4.7), среда Эндо (см. 7.4.8). Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±2) ч и отмечают рост типичных и атипичных колоний.
Типичные колонии колиформных бактерий:
– на VRBL-агаре – пурпурно-красные колонии диаметром не менее 0,5 мм, иногда окружены красноватой зоной преципитата (осадка) желчи;
– агаре лактозном с бриллиантовым зеленым и феноловым красным – зеленоватые колонии, окруженные яркой желто-зеленой зоной;
– среде Эндо – красные, розовые, бледно-розовые колонии, часто с металлическим блеском.
Атипичные колонии отличаются от типичных по цвету и размеру колоний.
8.1.2.2 Для дополнительного подтверждения отбирают не менее чем по пять типичных и атипичных колоний из чашек Петри с посевами (см. 8.1.2.1).
Атипичные колонии отбирают только те, в которых подтверждено наличие колиформных бактерий посевом в жидкую подтверждающую среду.
Каждую отобранную колонию пересевают на поверхность скошенного питательного агара (см. 7.4.10, 7.4.11). Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±2) ч.
Принадлежность выросших бактерий к колиформным бактериям определяют по отношению к окраске по Граму, по отсутствию оксидазы и по ферментации лактозы.
8.1.2.3 Окраска по Граму
Из подготовленных культур (см. 8.1.2.2) готовят мазки и окрашивают по Граму по ГОСТ 30425.
Допускается окраску по Граму заменять тестом Грегорсена по ГОСТ Р 52816.
8.1.2.4 Определение отсутствия оксидазы
Определение отсутствия оксидазы проводят по ГОСТ 29184.
Допускается использование дисков промышленного производства для определения оксидазы (см. 7.4.13).
8.1.2.5 Определение ферментации лактозы
Определение ферментации лактозы проводят по ГОСТ Р 52816.
8.1.2.6 Оценка результатов дополнительного подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям
По результатам дополнительного подтверждения к колиформным бактериям относят аэробные и факультативно-анаэробные не образующие спор грамотрицательные оксидазоотрицательные палочки, способные ферментировать лактозу с образованием кислоты и газа.
8.2 Определение количества колиформных бактерий
8.2.1 Определение количества колиформных бактерий методом НВЧ – по ГОСТ Р 52816.
Результаты выражают как “НВЧ колиформных бактерий в 1 г (см) продукта”.
8.2.2 Определение количества колиформных бактерий методом посева в/на агаризованные селективно-диагностические среды
8.2.2.1 Подготовка к проведению исследований – по разделу 7.
8.2.2.2 Отбор и подготовка проб – по 7.1.
8.2.2.3 Приготовление разведений – по 7.2.
8.2.2.4 Посев – по ГОСТ Р 52816.
8.2.2.5 Термостатирование – по ГОСТ Р 52816.
8.2.2.6 Подсчет количества колоний по ГОСТ Р 52816.
8.2.2.7 Подтверждение принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям
Для подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям отбирают не менее чем по пять типичных и атипичных колоний. Каждую отобранную колонию пересевают в пробирку с одной из жидких питательных сред (см. 7.4.2-7.4.5). Проведение подтверждения принадлежности выявленных бактерий к колиформным бактериям – по 8.1.1.
Оценка и выражение результатов по проведенному подтверждению – по 8.1.2.
8.2.2.8 Подсчет и выражение результатов
Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
В случае, когда не менее чем в четырех из пяти типичных и атипичных колоний подтвержден рост колиформных бактерий (не менее 80%), считают, что все колонии принадлежат к колиформным бактериям. В остальных случаях количество колиформных бактерий определяют исходя из процентного отношения подтвержденных колоний к общему количеству колоний, взятых для подтверждения.
Расчет количества колиформных бактерий, определенного посевом в/на агаризованные селективно-диагностические среды, на 1 г (см) продукта проводят по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ 26670.
Результаты определения количества колиформных бактерий в пробе продукта выражают и записывают по ГОСТ Р ИСО 7218, ГОСТ 26670.
Редакция документа с учетом
изменений и дополнений подготовлена
АО “Кодекс”
Источник
ГОСТ 7702.2.2-93
Группа H19
ОКСТУ 9209
Дата введения 1995-01-01
1 РАЗРАБОТАН Госстандартом России
ВНЕСЕН Техническим секретариатом Межгосударственного Совета по стандартизации, метрологии и сертификации
2 ПРИНЯТ Межгосударственным Советом по стандартизации, метрологии и сертификации 21 октября 1993 г.
За принятие проголосовали:
Наименование государства | Наименование национального органа |
Республика Беларусь | Госстандарт Республики Беларусь |
Кыргызская Республика | Кыргызстандарт |
Республика Молдова | Молдовастандарт |
Российская Федерация | Госстандарт России |
Республика Таджикистан | Таджикстандарт |
Туркменистан | Главгосслужба “Туркменстандартлары” |
3 Постановлением Комитета Российской Федерации по стандартизации, метрологии и сертификации от 02.06.94 N 160 межгосударственный стандарт ГОСТ 7702.2.2-93 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 01.01.95
4 ВЗАМЕН ГОСТ 7702.2-74 в части метода определения бактерий рода Эшерихи
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ
ИНФОРМАЦИОННЫЕ ДАННЫЕ
ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ
Настоящий стандарт распространяется на предназначенные для реализации и промышленной переработки:
мясо птицы в виде потрошеных, полупотрошеных и потрошеных с комплектом потрохов и шеей тушек, частей, полученных при их разделке, а также обваленное и измельченное;
субпродукты и полуфабрикаты птичьи.
Стандарт устанавливает методы выявления бактерий группы кишечных палочек и определения их количества.
Метод выявления основан на высеве определенного количества продукта или смывов с его поверхности и (или) их разведений в жидкие лактозосодержащие среды, инкубировании посевов при температуре (37±1) °С в течение (48±3) ч, подтверждении принадлежности выросших микроорганизмов по сбраживанию лактозы с образованием кислоты и газа и морфологическим признакам к бактериям группы кишечных палочек.
Метод определения количества бактерий группы кишечных палочек посевом в агаризованные дифференциальные среды предназначен для проб, содержащих в 1 г продукта более 150 КОЕ или в 1 см смыва более 15 КОЕ бактерий группы кишечных палочек.
Метод определения количества бактерий группы кишечных палочек посевом в жидкие питательные среды основан на методе наиболее вероятного числа (НВЧ) и предназначен для проб, содержащих в 1 г продукта менее 150 КОЕ, но в 10 г более 3 КОЕ или в 1 см смыва менее 15 КОЕ, но в 100 см смыва более 3 КОЕ.
1 Методы отбора проб и подготовка к исследованиям
2 Проведение исследования
2.1 Выявление бактерий группы кишечных палочек
2.1.1 Из продукта или его смыва в пробирки со средой Кесслер с поплавками по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0 пп.2.4.6; 2.4.7 проводят посев из соответствующих разведений. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С, предварительно их просматривают через (24±3) ч, отмечают положительную реакцию (пробирки с помутневшей средой, изменившей цвет с фиолетового на желто-зеленый, с наличием пузырьков газа в поплавках). При отсутствии газообразования реакцию считают сомнительной. Окончательный учет проводят через (48±3) ч.
2.1.2 Для подтверждения принадлежности микроорганизмов, выросших на среде Кесслер, к бактериям группы кишечных палочек делают пересевы штрихами на поверхность среды Эндо по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0 п.2.4.10 для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч. Чашки с посевами инкубируют дном вверх.
На среде Эндо бактерии группы кишечных палочек образуют красные, розовые, бледно-розовые колонии с металлическим блеском или без него.
2.1.3 Не менее чем из 5 колоний, выросших на агаризованной среде, готовят мазки с окрашиванием по Граму по ГОСТ 36425.
Бактерии группы кишечных палочек – грамотрицательные неспорообразующие палочки.
Результат считают положительным при обнаружении даже одной колонии с признаками бактерий группы кишечных палочек.
2.1.4 Для выявления бактерий группы кишечных палочек допускается использование жидких лактозосодержащих сред (Хейфеца по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.8 или бульона лактозного с бриллиантовым зеленым и желчью по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.9) с посевами и анализом по 2.1.1.
Для проведения пересевов (см. п.2.1.2) допускается использование среды Левина по ГОСТ 7702.2.0/ГОСТ Р 50396.0, 2.4.10. Бактерии группы кишечных палочек на среде Левина образуют колонии блестящие черные или темные с черным центром, или сиреневые с темным центром.
2.2 Определение количества бактерий группы кишечных палочек
2.2.1 При определении количества бактерий группы кишечных палочек посевом на агаризованную среду по 0,1 или 0,2 см разведения продукта или смыва с него наносят на поверхность двух параллельных чашек Петри со средой Эндо.
Посев немедленно равномерно растирают по поверхности среды шпателем – изогнутой стеклянной палочкой. Засеянную поверхность подсушивают в течение 15 мин, для этого открытые чашки переворачивают вверх дном и выдерживают в горизонтальном положении в условиях, обеспечивающих испарение конденсационной влаги, исключающих микробное загрязнение. Посевы инкубируют при температуре (37±1) °С в течение (24±3) ч. Отбирают чашки, на которых выросло от 15 до 150 характерных колоний. Не менее 5 колоний используют для микроскопирования и пересева на жидкие лактозосодержащие среды для подтверждения их принадлежности к бактериям группы кишечных палочек.
2.2.2 При определении количества бактерий группы кишечных палочек по методу НВЧ высевают три последовательных 10-кратных разведения продукта или смыва с него. Каждое разведение в трехкратной повторности высевают в пробирки с одной из жидких лактозосодержащих питательных сред. Соотношение между количеством высеваемого материала и питательной средой 1:9. Инкубирование и анализ проводят, как указано в 2.1.1-2.1.4.
3 Обработка результатов
3.1 Результаты оценивают по каждой пробе отдельно.
3.2 При обнаружении в посевах грамотрицательных неспорообразующих палочек, сбраживающих при температуре (37±1) °С лактозу с образованием кислоты и газа, дают заключение о том, что обнаруженные микроорганизмы относятся к бактериям группы кишечных палочек.
3.3 Результаты записывают следующим образом.
3.3.1 При выделении бактерий группы кишечных палочек из продукта или смыва с него записывают: бактерии группы кишечных палочек обнаружены или не обнаружены, при этом указывается навеска продукта в граммах или объем смыва в кубических сантиметрах, или площадь смыва в квадратных сантиметрах.
3.3.2 При определении количества бактерий группы кишечных палочек посевом в агаризованные среды подсчет микроорганизмов проводят по ГОСТ 7702.2.1/ГОСТ Р 50396.1, 3.2, при посеве в жидкие питательные среды – по ГОСТ 36425.
3.3.3 Результаты количественного определения бактерий группы кишечных палочек записывают, как указано в ГОСТ 7702.2.1/ГОСТ Р 50396.1, 3.3.
Текст документа сверен по:
официальное издание
Мясо птицы и продукты его переработки.
Технические условия и методы анализа:
Сб. ГОСТов – М.: ИПК Издательство стандартов, 2001
ГОСТ 7702.2.2-93 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты птичьи. Методы выявления и определения количества бактерий группы кишечных палочек (колиформных бактерий родов Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia)
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате pdf или djvu
Источник