Число кишечных палочек на литр
Вирусы и бактерии
Патогенные микроорганизмы относятся к паразитам, развивающимся на органическом субстрате. Микробы, попадающие в воду, могут вызвать такие заболевания как брюшной тиф, паратиф, амебиаз, острый гастроэнтерит, дизентерия, бруцеллез, инфекционный гепатит, холера, сибирская язва, полиомиелит, туляремия, туберкулез и многие другие.
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) приводит данные о том, что до 80% всех заболеваний в мире связано с употреблением в пищу воды неудовлетворительного качества. Дополнительную роль играет и нарушения санитарно-гигиенических требований при организации водоснабжения.
Проблема недостатка качественной питьевой воды по-прежнему не теряет своей актуальности.
Показатели микробиологии воды
Основной микробиологический показатель — число микробов — количество бактерий и др. микроорганизмов, содержащихся в 1 мл воды.
По санитарно-гигиеническим нормам, количество бактерий в 1 мл питьевой воды не должно превышать 100.
О безопасности питьевой воды также судят по количеству в ней бактерий группы кишечной палочки (E. Coli). Если в воде присутствует кишечная палочка — значит, она была загрязнена фекальными стоками, и в нее могли попасть возбудители многих инфекционных заболеваний.
Определение всего многообразия бактерий в воде слишком трудоемко, поэтому эпидемические показатели воды по микробиологии включают в себя определение коли-титра и коли-индекса по бактериям кишечной палочки.
Коли-титр — это минимальный объем воды в мл, в котором обнаруживается одна бактерия кишечная палочка.
Коли-титр определяют методом брожения, который заключается в исследовании воды на содержание в ней бактерий при температуре 37°C. Ориентировочно за коли-титр принимают тот наименьший объем воды, при исследовании которого были найдены кишечные палочки. Вероятные значение коли-титра для воды, сыворотки, молока, кваса, других различных стоков определяют при помощи таблицы, сравнивая полученные результаты. Учет выросших бактерий на плотных средах и мембранных фильтрах считается более точным, чем метод брожения, описанный выше.
Обратная величина — коли-индекс — показывает количество обнаруженных кишечных палочек в 1 л воды.
Коли-индекс определяют с применением метода мембранных фильтров или непосредственного посева разного объема исследуемой жидкости на плотные питательные среды. Мембранные фильтры задерживают на поверхности мембран различные бактерии. После этого фильтры помещают в емкости со средой при температуре 37°C и исследуют рост колоний бактерий различных цветов. Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и затем проводят перерасчет на 1 л жидкости.
Санитарные нормы:
— значение параметра коли-титр для питьевой воды должно быть не менее 300,
— коли-индекс — до 3,
— микробное число не должно быть больше 100.
Чтобы получить более точные данные о наличии различных микроорганизмов в воде и степени их загрязнений, необходимо наряду с определением коли-индекса (коли-титра) для кишечных палочек проводить исследование воды и на другие микробиологические организмы, например энтерококки, споровые анаэробы, кишечные бактериофаги.
Источник
Коли-индекс – количество кишечных палочек в 1 л воды.
Установив коли-титр, можно произвести пересчет на коли-индекс. В отличие от других микроорганизмов, кишечная палочка может размножаться при температуре до 45°С, легко сбраживать углеводы с образованием кислоты и газа. Это свойство микроба положено в основу определения коли-титра.
Существует несколько методов определения ОКБ, ТКБ и коли-титра.
Метод мембранных фильтров. Сущность этого метода заключается в концентрировании микробов из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на фильтрах на среде Эндо и дифференцированием выросших колоний.
Мембранные фильтры № 3 кипятят в дистиллированной воде, кладут на асбестовый фильтр Зейтца и фильтруют через него определенное соответствующей методикой количество воды (например, питьевой воды – 333 см3, воду открытых источников – в нескольких объемах: 100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3). После окончания фильтрации фильтр захватывают стерильным пинцетом и кладут на поверхность среды Эндо в чашках Петри. Инкубируют в термостате 18-24 ч. При обнаружении на фильтре колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском или без него), готовят мазки, окрашивают по Граму, ставят оксидазную пробу. Оксидазной пробой дифференцируют кишечную палочку от других грамотрицательных водных сапрофитов, которые в отличие от кишечной палочки обладают ферментом оксидазой (например, Pseudomonas sp.)
Подсчитывают лактозоположительные оксидазоотрицательные колонии грамотрицательных микробов, что характерно для кишечной палочки, и вычисляют коли-индекс.
Пример: профильтровано три объема воды по 100 см3. На первом фильтре выросло 3 колонии кишечной палочки, на втором – 5 колоний, на третьем – 4 колонии. Среднее арифметическое (3+5+4) : 3=4 колонии при посеве 100 мл воды, соответственно в 1000 мл – 40 кишечных палочек. Значит коли-индекс равен 40, коли-титр равен 25 (1000 : 40).
Бродильный метод. Сущность этого метода заключается в посеве определенных объемов воды в дифференциально-диагностические среды. При наличии изменений сред, характерных для роста кишечной палочки, пересевают культуру на среду Эндо и проводят ее идентификацию.
В зависимости от водоисточника, проводят посев различных объемов воды. Например, при исследовании воды открытых водоемов – 100 см3,
10 см3, 1 см3, 0,1 см3. Объемы 100 см3 и 10 см3 высевают в колбы или флаконы, 1 см3 и 0,1 см3 — в пробирки.
Для исследования воды бродильным методом используют дифференциально-диагностические среды Кода (с лактозой и индикатором бромтимоловым синим), Хейфеца (с маннитом, розоловой кислотой и метиленовым синим), Кесслера (с лактозой и генцианом фиолетовым), Булира (с маннитом и нейтральным красным с поплавком). Посевы воды культивируют в термостате при 37°С или при 44°С в течение суток. Из пробирок и флаконов, в которых отмечено помутнение среды, образование кислоты или газа при расщеплении углевода, производят пересев на среду Эндо бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. При обнаружении темно-красных колоний с металлическим блеском или без него проводят микроскопию с окраской по Граму и дальнейшую идентификацию кишечной палочки по общепринятой методике.
Результат анализа выражают в виде коли-индекса, который определяют по специальным таблицам. Так, например, при отсутствии роста кишечной палочки во всех объемах воды (100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3) коли-индекс будет менее 9, коли-титр — более 111.
По ГОСТу коли-титр водопроводной воды в городах должен быть не менее 300 (коли-индекс не более 3), в многомиллионных городах коли-титр не менее 500 (коли-индекс не более 2). Вода открытых водоемов считается хорошей при коли-титре 100, коли-индексе 10.
В настоящее время наряду с определением коли-титра в воде проводят также определение титра Enterococcus faecalis. Для этого цельную воду и ее разведения в объеме 1 см3 засевают в одну из жидких элективных сред для энтерококков (щелочно-полимиксиновая энтерококковая среда и др.), а затем проводят идентификацию данных микроорганизмов.
В качестве СПМО воды используют также бактериофаги кишечной палочки – коли-фаги, а также фаги сальмонелл и шигелл. Их обнаруживают там, где есть соответствующие бактерии, к которым эти фаги адаптированы. Фаги выживают во внешней среде более 9 мес. Они ценны как показатель фекального загрязнения, особенно энтеровирусами, так как фаги выделяются из сточных вод с той же частотой, что и энтеровирусы (например, возбудитель гепатита А человека). По устойчивости к хлору фаги сравнимы с энтеровирусами, поэтому их считают одним из показателей качества очистки сточных вод.
Коли-фаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при температуре 370С через 18 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки, негативные колонии) на питательном агаре.
Метод определения коли-фагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении их в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре. Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.
Источник
Наименьшее количество воды, в котором обнаружено присутствие кишечной палочки
Общее количество бактерий в 1 л воды
Бактериологический контроль нестерильных лекарственных средств предполагает возможность присутствия незначительного количества групп микроорганизмов. Каких именно?
Сарцины
Кишечная палочка
Синегнойная палочка
Золотистый стафилококк
Гемолитический стрептококк
При исследовании бактериального загрязнения воздуха учитывают общее количество микроорганизмов в определенном объеме, а также качественный состав микрофлоры. Какие микроорганизмы являются санитарно показательными для воздуха закрытых помещений
Кишечная палочка
Сенная палочка
Дрожжевые грибы
Золотистый стафилококк
Плесневые грибы
Для характеристики бактериального загрязнения почвы, источником которого является человек или животные определяют санитарно показательные микроорганизмы. Какой микроорганизм свидетельствует о давнем фекальном загрязнении почвы?
Clostridium perfringens
Escherichia coli
Streptococcus faecalis
Salmonella enteritidis
Pseudomonas aeruginosa
В соответствии с требованиями ВОЗ и Фармакопеи Украины в ушных каплях количество микроорганизмов в 1 мл препарата не должно превышать:
100000 микробных клеток(бактерий и грибов)
10000 микробных клеток(бактерий и грибов)
1000 микробных клеток(бактерий и грибов)
Микробных клеток(бактерий и грибов)
10 микробных клеток(бактерий и грибов)
Качество лекарственных препаратов оценивают по ряду показателей, включая “микробиологическую чистоту”. Укажите лекарственные формы, в которых допускается значительно больше по сравнению с другими формами количество сапрофитных бактерий?
Инъекционные растворы
Настои
Аэрозоли
Суппозитории
Глазные капли
После дорожно-траспортного происшествия пострадавшему оказали медпомощь и ввели иммунологический препарат для создания пассивного искусственного иммунитета против анаэробной инфекции. Какой это препарат?
Антитоксическая сыворотка
Анатоксин
Живая вакцина
Иммунотоксин
Химическая вакцина
При проверке состояния воздуха в аптечном помещении, где изготовляются инъекционные формы лекарств седиментационным методом выявлено 5 мелких округлых колоний, вокруг которых четко видно зону гемолиза. На какую среду сделан посев?
Желточно-солевой агар
Среда Левина
Среда Эндо
Кровяной агар
МПА
В соответствии к требованиям Фармакопеи лекарственные препараты для местного применения должны подвергаться контролю на “микробиологическую чистоту”. Выявление каких микроорганизмов свидетельствует о непригодности этой группы препаратов в медпрактике?
Дрожжевые грибы
Сапрофитные стафилококки
Плесневые грибы
Синегнойная палочка
Сарцины
Результаты микробиологического исследования настоя из листьев мяты перечной свидетельствуют о его несоответствии требованиям Фармакопеи – выявлена патогенная микрофлора. Укажите наличие какой микрофлоры стало причиной этого?
Эпидермальный стафилококк
Микрококки
Дрожжеподобные грибы
Золотистый стафилококк
Плесневые грибы
Во время сбора лекарственного сырья на плантациях обнаружено большое количество растений с мозаичной окраской листьев. Какой вероятный агент вызвал такое поражение растений?
Фитопатогенные вирусы
Фитопатогенные бактерии
Токсические вещества почвы
Микроскопические клещи
Нематоды
На фармацевтическое предприятие поступила партия сырья растительного происхождения для приготовления фитопрепарата. Какой микробиологический тест необходимо использовать для оценки качества этого сырья?
Антимикробную активность
Пирогены
Коли-титр
Коли-индекс
Общее количество микроорганизмов в 1 г сырья
После длительного лечения антибиотиками у больной в мазках из вагинального секрета выявлены клетки овальной формы с четко дифференцированным ядром, некоторые клетки почкуются. Какие препараты необходимо применить для лечения в случае подтверждения диагноза кандидоз?
Антипротозойные
Противовирусные
Антихламидийные
Противогрибковые
Антибактериальные
Для предупреждения инфекционных заболеваний широко используется вакцинация населения. Какой вид иммунитета обеспечивает введение вакцин?
Искусственный активный иммунитет
Естественный активный иммунитет
Искусственный пассивный иммунитет
Естественный пассивный иммунитет
Видовой иммунитет
Патогенным микроорганизмам присуще наличие ферментов агрессии, которые определяют их вирулентность. Выберите среди перечисленных такой фермент:
Трансфераза
Карбогидраза
Гиалуронидаза
Оксидаза
Лиаза
Наличие патогенных микроорганизмов в воздухе можно предусмотреть по присутствию санитарно-показательных бактерий. Выберите среди перечисленных бактерии, которые являются показателем непосредственной эпидемиологической опасности:
Микрококки
Сарцины
Плесневые грибы
Дрожжевые грибы
Источник
КАТЕГОРИИ:
Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748)
Определение микробного числа воды.
Порядок выполнения работы.
Микробное число воды – это количество колоний микроорганизмов, вырастающих при посеве 1 мл воды на РПА за 24 часа при температуре 37° С. Этим показателем определяются не все микроорганизмы, а только те, которые способны расти на РПА при указанной температуре, т.е. это сапрофитные, мезофильные, аэробные и часть факультативно-анаэробных микробов. Микробное число воды характеризует общую загрязненность её микроорганизмами и для водопроводной воды не должно превышать 50.
При определении микробного числа водопроводной воды, воды из родников, артезианских скважин пробу сеют без разведения, а воду из открытых водоемов разбавляют стерильной водой. Степень разведения выбирают, исходя из предполагаемой загрязненности воды. Из каждой пробы употребляют для посева не менее двух различных разведений, с тем, чтобы на чашках вырастало от 30 до 300 колоний. Воду вносят стерильной пипеткой в стерильную чашку Петри, соблюдая правила стерильности, затем в чашку вливают 15 мл расплавленного и охлажденного до 45°С РПА или МПА, вращательным движением перемешивают воду с питательной средой. После застывания среды чашки вверх дном помещают в термостат. На крышке записывают все данные об анализе. Посевы водопроводной воды выращивают 24 часа при температуре 37°С, а посевы воды из естественных водоемов ещё 48 часов при температуре 20°С. Подсчитывают колонии как в глубине, так и на поверхности среды. Чашки не учитываются, если при посеве 1 мл воды из разведения 1:100 и более выросло меньше 20 колоний, а также не учитываются чашки при наличии в них роста ползущих колоний, маскирующих более ½ чашки.
Просчитывают среднее арифметическое по параллельным пробам. При малом числе колоний просчитывают колонии на всей поверхности чашки, при обильном росте колоний допустимо просчитать колонии в 10 квадратах по 1 см2, определить среднюю по 10 просчетам и пересчитать на площадь чашки Петри по формуле:
М=pr2 * n , где:
М – микробное число воды, кл/мл;
n – среднее число колоний на 1 см2 площади чашки Петри;
r – радиус чашки Петри = 4,5 см;
p – 3,14.
Результат просчета округляют следующим образом:
Таблица 4.
Результаты просчета
| Количество колоний в чашке | Результат |
| От 1 до 100 | Фактическое число подсчитанных колоний |
| От 101 до 1000 | Округлить до десятка |
| От 1001 до 10000 | Округлить до сотни |
| От 10001 до 100000 | Округлить до тысячи |
| От 100001 до 1000000 | Округлить до десятков тысяч |
E. coli является нормальным обитателем – комменсалом микрофлоры кишечника человека и животных. У рыб, диких птиц и насекомых E. Coli является случайным паразитом и попадает к ним при контакте с фекалиями человека и домашних животных. Так, у домашних уток, гусей она обнаруживается постоянно, а у диких – только в редких случаях. У животных Арктики кишечная палочка обнаруживается только в 10% случаев, такие же результаты получены при исследовании почвы и водоемов. В девственных почвах Арктики, на высокогорьях никаких разновидностей E. coli не встречается. При непостоянном загрязнении почвы в ней обнаруживаются E. coli citrovorum и E. coli aerogenes – результат длительного пребывания E. coli в сапрофитных условиях.
Считается, что сначала E. coli стала непатогенным паразитом кишечника человека, с приручением животных она перешла к ним. При интенсивном обмене кишечной флорой между животными организмами, отдельные разновидности кишечной палочки со свойствами патогенности в больших сообществах получили преимущество (вызывали диарею). Это было полезно для распространения бактерии, поэтому это свойство закрепилось, и при дальнейшей эволюции бактерии появились и более патогенные штаммы.
Кишечная палочка – сборная совокупность бактерий, имеющих общие признаки, которые могут сильно изменяться в зависимости от того биоценоза, в котором микроб развивается. Особенно резко свойства кишечной палочки меняются, когда в организм хозяина внедряются патогенные микробы. В этом случае E. coli может утратить способность сбраживать лактозу (образуются лактозонегативные варианты – штаммы E. coli). Такие бактерии в массовых количествах выделяются от больных брюшным тифом, паратифом, дизентерией в конце болезни и в начале периода выздоровления.
E. coli была открыта в 1885 году Эшерихом. Она представляет собой небольшую грамотрицательную палочку, длина палочки 2,5-3,0 мкм, поперечник 0,5-0,8 мкм, может давать кокковидные формы и нити, спор не образует, некоторые штаммы образуют капсулу, большинство подвижны, имеют 2-6 жгутиков, но встречаются и неподвижные формы.
Кишечная палочка хорошо растет на МПА, РПА, РБ, МБ. На плотных средах она дает круглые мелкозернистые колонии 2-3 мм в диаметре, молочно-голубоватые, колонии могут быть гладкими и шероховатыми. При росте на бульоне сначала появляется диффузное помутнение, через несколько дней образуется осадок, а на поверхности – нежная пленка.
E. coli сбраживает глюкозу, лактозу, мальтозу, маннит с образованием кислоты и газа по типу гетероферментативного молочнокислого брожения, сахарозу не сбраживает. Желатин не разжижает, разлагает триптофан с образованием индола (но встречаются формы, не образующие индол), створаживает молоко через 1-4 суток, сероводород не образует.
Международный стандарт дифференцирует бактерии группы кишечной палочки E. coli и бактерии фекально-кишечной палочки.
Бактерии группы кишечной палочки (БГКП) сбраживают лактозу при температуре 35-37° С, а бактерии группы фекальной кишечной палочки (БГФКП) сбраживают её при 44°С.
Идентификация кишечных палочек осуществляется на основании группы признаков ТИМАЦ (ТЛИМАЦ): Т – температурный тест (тест Эйкмана). Для E. coli этот тест положительный, т.к. она сбраживает углеводы при температуре 43-44° С до кислоты и газа. Большинство бактерий других групп этим признаком не обладают. Однако, имеются сведения о том, что повышенная температура не является оптимальной для E. coli, и рост E. coli, выделенной из фекалий при температуре 37° С интенсивнее, чем при 43° С.
И – образование индола. E. coli образует индол при расщеплении триптофана, тиразина, фенилаланина. Определение индола:
1) по методу Мореля – в пробирку с культурой исследуемой бактерии подвешивают индикаторную бумажку, смоченную 12% раствором щавелевой кислоты. На следующий день в присутствии индола бумажка розовеет. Этот метод достаточно простой и удобный.
2) Метод Легаль-Вейля более чувствителен. К суточной или двухсуточной бульонной культуре добавляют 5 капель 5% раствора нитропруссида натрия, 5 капель 40% раствора NaOH и 7 капель концентрированной СН3СООН. В присутствии индола появляется сине-зеленое или темно-синее окрашивание.
М – реакция с метиловым красным служит для определения интенсивности кислотообразования. К жидкой культуре бактерий добавляют индикатор метиловый красный. При интенсивном кислотообразовании, что характерно для E. coli, окраска культуры меняется на малиновый цвет.
А – реакция образования ацетилметилкарбинола (ацетоин СН3СНОНСООСН3) – реакция Фогес-Проскауэра. К жидкой культуре бактерий добавляют 40% раствор КОН, в присутствии ацетилметилкарбинола появляется розовое окрашивание. E. coli не образует ацетилметилкарбинол.
Ц – цитратный тест. Характеризует способность бактерий усваивать лимонную кислоту или ее соли в жидкой питательной среде Козера или плотной питательной среде Симмонса. Фекальные кишечные палочки не растут на этих средах. Эти бактерии цитратотрицательные. Если бактерия способна усваивать цитраты – цитратположительная, это говорит о том, что кишечная палочка довольно длительное время выживала в природной среде и уже не является показателем свежего фекального загрязнения.
Л – сбраживание лактозы. Санитарно-показательные формы сем. Enterobacteriaceae сбраживают лактозу с образованием кислоты и газа (лактозоположительные формы). Патогенные бактерии из этого семейства – сальмонеллы и шигеллы лактозу не сбраживают.
Дополнительный тест – способность бактерий расщеплять мочевину. E. coli мочевину не расщепляет.
Большинство кишечных палочек подвижны. Подвижность бактерий определяют в столбике питательной полужидкой среды Гисса или среде Пешкова. Посев выполняют уколом. Неподвижные бактерии растут в виде тяжа, подвижные вызывают общее помутнение среды.
Таблица 5.
Классификация бактерий группы кишечной палочки по Минкевичу, основанная на эволюционном развитии сем. Enterobacteriaceae
| Вид бактерии | Рост на цитратах | Реакция с метилрот | Реакция Фогес-Проскауэра | Образование индола | Бродильная при 44º С | Подвижность | Образование H2S | Расщепление мочевины |
| E. coli commune | – | + | – | + / – | + | + / – | – | – |
| E. coli citrovorum | + | – редко + | – | – редко + | – редко + | + / – | + / – | – |
| E. coli aerogеnes | + | – | + | – | – | + | – | + / – |
Желатин бактерии не разжижают, за исключением E. coli aerogenes, у которой этот признак вариабелен.
Попадая во внешнюю среду, E. coli commune приспосабливается и через полгода превращается в E. coli citrovorum, начинает расти на средах с цитратами, сбраживать сахарозу и прекращает сбраживать сахара при температуре 43º С, далее она превращается в E. coli aerogenes, которая к вышеперечисленным признакам приобретает способность вырабатывать ацетилметилкарбинол.
На питательной среде Левина E. coli образует фиолетовые колонии, на бактоагаре – красные, Киченко – желтые, на среде Ресселя с индикатором Андреде – красные.
Дата добавления: 2015-07-02; Просмотров: 1695; Нарушение авторских прав?
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Рекомендуемые страницы:
Читайте также:
Источник