Число кишечных палочек в одном литре
Вирусы и бактерии
Патогенные микроорганизмы относятся к паразитам, развивающимся на органическом субстрате. Микробы, попадающие в воду, могут вызвать такие заболевания как брюшной тиф, паратиф, амебиаз, острый гастроэнтерит, дизентерия, бруцеллез, инфекционный гепатит, холера, сибирская язва, полиомиелит, туляремия, туберкулез и многие другие.
Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) приводит данные о том, что до 80% всех заболеваний в мире связано с употреблением в пищу воды неудовлетворительного качества. Дополнительную роль играет и нарушения санитарно-гигиенических требований при организации водоснабжения.
Проблема недостатка качественной питьевой воды по-прежнему не теряет своей актуальности.
Показатели микробиологии воды
Основной микробиологический показатель — число микробов — количество бактерий и др. микроорганизмов, содержащихся в 1 мл воды.
По санитарно-гигиеническим нормам, количество бактерий в 1 мл питьевой воды не должно превышать 100.
О безопасности питьевой воды также судят по количеству в ней бактерий группы кишечной палочки (E. Coli). Если в воде присутствует кишечная палочка — значит, она была загрязнена фекальными стоками, и в нее могли попасть возбудители многих инфекционных заболеваний.
Определение всего многообразия бактерий в воде слишком трудоемко, поэтому эпидемические показатели воды по микробиологии включают в себя определение коли-титра и коли-индекса по бактериям кишечной палочки.
Коли-титр — это минимальный объем воды в мл, в котором обнаруживается одна бактерия кишечная палочка.
Коли-титр определяют методом брожения, который заключается в исследовании воды на содержание в ней бактерий при температуре 37°C. Ориентировочно за коли-титр принимают тот наименьший объем воды, при исследовании которого были найдены кишечные палочки. Вероятные значение коли-титра для воды, сыворотки, молока, кваса, других различных стоков определяют при помощи таблицы, сравнивая полученные результаты. Учет выросших бактерий на плотных средах и мембранных фильтрах считается более точным, чем метод брожения, описанный выше.
Обратная величина — коли-индекс — показывает количество обнаруженных кишечных палочек в 1 л воды.
Коли-индекс определяют с применением метода мембранных фильтров или непосредственного посева разного объема исследуемой жидкости на плотные питательные среды. Мембранные фильтры задерживают на поверхности мембран различные бактерии. После этого фильтры помещают в емкости со средой при температуре 37°C и исследуют рост колоний бактерий различных цветов. Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и затем проводят перерасчет на 1 л жидкости.
Санитарные нормы:
— значение параметра коли-титр для питьевой воды должно быть не менее 300,
— коли-индекс — до 3,
— микробное число не должно быть больше 100.
Чтобы получить более точные данные о наличии различных микроорганизмов в воде и степени их загрязнений, необходимо наряду с определением коли-индекса (коли-титра) для кишечных палочек проводить исследование воды и на другие микробиологические организмы, например энтерококки, споровые анаэробы, кишечные бактериофаги.
Источник
КОЛИ-ИНДЕКС, КОЛИ-ТИТР — количественные показатели фекального загрязнения воды, пищевых продуктов, почвы и других объектов окружающей среды, основанные на исследовании содержания в них кишечной палочки.
Кишечная палочка (см.) выбрана в качестве санитарно-показательного микроорганизма, т. к. она в значительном количестве выделяется с фекалиями в окружающую среду, где длительно сохраняется и легко может быть изолирована и идентифицирована. Присутствие кишечной палочки в исследуемых субстратах указывает на возможность наличия в них других, в т. ч. патогенных для человека микроорганизмов кишечной группы, непосредственное обнаружение которых затруднено. Высокое содержание кишечной палочки в тех или иных субстратах может свидетельствовать об интенсивном фекальном загрязнении и повышает эпидемиол. опасность этих субстратов. Поэтому питьевая вода и различные пищевые продукты подвергаются постоянному санитарно-бактериол. контролю, предусматривающему определение коли-титра и коли-индекса.
Коли-индекс — количество кишечных палочек, обнаруживаемое в 1 л жидкости или 1 кг твердого вещества (для пищевых продуктов и почвы — в 1 г). Коли-индекс определяется методом мембранных фильтров или путем непосредственного посева различных количеств исследуемого материала на плотные среды. Сущность метода мембранных фильтров заключается в фильтровании определенных объемов исследуемой жидкости (или твердого вещества, разведенного в воде) через мембранные фильтры № 2 или № 3, на которых задерживаются бактерии. Фильтры переносят на чашки со средой Эндо, инкубируемые при t°37°, а затем исследуют выросшие на поверхности фильтра темно-красные с металлическим блеском, а также розовые и прозрачные колонии. Из колоний каждого типа готовят мазки и окрашивают их по Граму. Колонии разных типов проверяют на оксидазную активность, к-рая должна быть отрицательной. Бесцветные и розовые колонии дополнительно засевают на полужидкую среду с глюкозой и индикатором, на к-рой в течение 24-часовой инкубации при t° 37° должны образоваться кислота и газ. Для определения коли-индекса подсчитывают выросшие на фильтре колонии кишечной палочки и затем проводят перерасчет на 1 л, 1 кг или 1 г в зависимости от исследуемого материала. Таким же образом проводят изучение колоний и их подсчет при прямом высеве материала на среду Эндо.
Коли-титр — наименьшее количество жидкости или твердого вещества (выраженное соответственно в миллилитрах или граммах), в к-ром обнаруживаются кишечные палочки. Коли-титр определяют бродильным методом, заключающимся в посеве определенных объемов исследуемого субстрата в среды накопления, которые выдерживают при t° 37°. В качестве сред накопления используют глюкозопептонную или лактозопептонную среду с индикатором и поплавком и другие подобные среды. Большие объемы засевают в концентрированную среду, малые объемы — в пробирки со средой нормальной концентрации. Из всех помутневших пробирок, вне зависимости от образования кислоты и газа, делают высевы на среду Эндо с последующей идентификацией выросших колоний.
Ориентировочно за коли-титр принимают тот наименьший объем, при посеве к-рого на среды накопления выявлены кишечные палочки. Наиболее вероятное значение коли-титра воды, молока, пива и др. определяют с помощью специальных расчетных таблиц, сопоставляя с ними полученные результаты. В целом бродильный метод менее точен, чем учет выросших бактерий на плотных средах и мембранных фильтрах.
Коли-титр — величина, обратная коли-индексу, который является прямым показателем фекального загрязнения. Возможен пересчет коли-титра в коли-индекс и обратно. Предельно допустимые величины коли-титра (коли-индекса) нормированы общесоюзным стандартом или республиканскими техническими условиями, а также специальными инструкциями органов здравоохранения и других ведомств. Напр., по ГОСТ 2874 — 73 коли-индекс на питьевую воду, поступающую к потребителям через краны водопроводной сети, должен быть не более 3, а коли-титр не менее 300.
Для получения более точных данных о наличии и степени фекального загрязнения объектов считается целесообразным наряду с определением коли-титра (коли-индекса) проводить одновременный количественный учет в исследуемом материале и других санитарно-показательных микроорганизмов (напр., протея, энтерококков, споровых анаэробов, кишечных бактериофагов); в некоторых странах такое комплексное определение введено в практику при санитарно-бактериол. исследовании воды.
См. также Микробное число.
Библиография: Методы санитарно-микробиологического исследования объектов окружающей среды, под ред. Г. И. Сидоренко, М., 19 78; Санитарная микробиология, под ред. Г. П. Калины и Г. Н. Чистовича, М., 1969.
Н. С. Горячкина.
Источник: Большая Медицинская Энциклопедия (БМЭ), под редакцией Петровского Б.В., 3-е издание
Рекомендуемые статьи
Источник
Коли-индекс – количество кишечных палочек в 1 л воды.
Установив коли-титр, можно произвести пересчет на коли-индекс. В отличие от других микроорганизмов, кишечная палочка может размножаться при температуре до 45°С, легко сбраживать углеводы с образованием кислоты и газа. Это свойство микроба положено в основу определения коли-титра.
Существует несколько методов определения ОКБ, ТКБ и коли-титра.
Метод мембранных фильтров. Сущность этого метода заключается в концентрировании микробов из определенного объема воды на мембранных фильтрах с последующим выращиванием их на фильтрах на среде Эндо и дифференцированием выросших колоний.
Мембранные фильтры № 3 кипятят в дистиллированной воде, кладут на асбестовый фильтр Зейтца и фильтруют через него определенное соответствующей методикой количество воды (например, питьевой воды – 333 см3, воду открытых источников – в нескольких объемах: 100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3). После окончания фильтрации фильтр захватывают стерильным пинцетом и кладут на поверхность среды Эндо в чашках Петри. Инкубируют в термостате 18-24 ч. При обнаружении на фильтре колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском или без него), готовят мазки, окрашивают по Граму, ставят оксидазную пробу. Оксидазной пробой дифференцируют кишечную палочку от других грамотрицательных водных сапрофитов, которые в отличие от кишечной палочки обладают ферментом оксидазой (например, Pseudomonas sp.)
Подсчитывают лактозоположительные оксидазоотрицательные колонии грамотрицательных микробов, что характерно для кишечной палочки, и вычисляют коли-индекс.
Пример: профильтровано три объема воды по 100 см3. На первом фильтре выросло 3 колонии кишечной палочки, на втором – 5 колоний, на третьем – 4 колонии. Среднее арифметическое (3+5+4) : 3=4 колонии при посеве 100 мл воды, соответственно в 1000 мл – 40 кишечных палочек. Значит коли-индекс равен 40, коли-титр равен 25 (1000 : 40).
Бродильный метод. Сущность этого метода заключается в посеве определенных объемов воды в дифференциально-диагностические среды. При наличии изменений сред, характерных для роста кишечной палочки, пересевают культуру на среду Эндо и проводят ее идентификацию.
В зависимости от водоисточника, проводят посев различных объемов воды. Например, при исследовании воды открытых водоемов – 100 см3,
10 см3, 1 см3, 0,1 см3. Объемы 100 см3 и 10 см3 высевают в колбы или флаконы, 1 см3 и 0,1 см3 — в пробирки.
Для исследования воды бродильным методом используют дифференциально-диагностические среды Кода (с лактозой и индикатором бромтимоловым синим), Хейфеца (с маннитом, розоловой кислотой и метиленовым синим), Кесслера (с лактозой и генцианом фиолетовым), Булира (с маннитом и нейтральным красным с поплавком). Посевы воды культивируют в термостате при 37°С или при 44°С в течение суток. Из пробирок и флаконов, в которых отмечено помутнение среды, образование кислоты или газа при расщеплении углевода, производят пересев на среду Эндо бактериологической петлей густым штрихом для получения изолированных колоний. При обнаружении темно-красных колоний с металлическим блеском или без него проводят микроскопию с окраской по Граму и дальнейшую идентификацию кишечной палочки по общепринятой методике.
Результат анализа выражают в виде коли-индекса, который определяют по специальным таблицам. Так, например, при отсутствии роста кишечной палочки во всех объемах воды (100 см3, 10 см3, 1 см3, 0,1 см3) коли-индекс будет менее 9, коли-титр — более 111.
По ГОСТу коли-титр водопроводной воды в городах должен быть не менее 300 (коли-индекс не более 3), в многомиллионных городах коли-титр не менее 500 (коли-индекс не более 2). Вода открытых водоемов считается хорошей при коли-титре 100, коли-индексе 10.
В настоящее время наряду с определением коли-титра в воде проводят также определение титра Enterococcus faecalis. Для этого цельную воду и ее разведения в объеме 1 см3 засевают в одну из жидких элективных сред для энтерококков (щелочно-полимиксиновая энтерококковая среда и др.), а затем проводят идентификацию данных микроорганизмов.
В качестве СПМО воды используют также бактериофаги кишечной палочки – коли-фаги, а также фаги сальмонелл и шигелл. Их обнаруживают там, где есть соответствующие бактерии, к которым эти фаги адаптированы. Фаги выживают во внешней среде более 9 мес. Они ценны как показатель фекального загрязнения, особенно энтеровирусами, так как фаги выделяются из сточных вод с той же частотой, что и энтеровирусы (например, возбудитель гепатита А человека). По устойчивости к хлору фаги сравнимы с энтеровирусами, поэтому их считают одним из показателей качества очистки сточных вод.
Коли-фаги – бактериальные вирусы, способные лизировать E.coli и формировать при температуре 370С через 18 ч зоны лизиса бактериального газона (бляшки, негативные колонии) на питательном агаре.
Метод определения коли-фагов в питьевой воде заключается в предварительном накоплении их в среде обогащения на культуре E.coli и последующем выявлении зон лизиса (просветления) газона E.coli на питательном агаре. Метод предназначен для проведения текущего контроля качества питьевой воды.
Источник
БГКП – это колиморфные бактерии, которые относятся к семейству энтеробактерий и используются в качестве определителя фекальной контаминации. Они имеют принципиальные отличия от стафилококков – данная категория представлена разнородными микроорганизмами, к которым относятся представители родов Citrobacter, Escherichia, Enterobacter и другие бациллы. Их объединяет схожесть с главной представительницей флоры кишечника – кишечной палочкой. Несмотря на некоторое сходство, на микробиологических питательных средах они способствуют образованию колонии другого цвета и вида.
Эшерихии имеет отличия от цитробактера и энтеробактера и заключаются они в свойствах размножения. Данная особенность позволяет определить, как давно произошло микробное обсеменение. Если при проверке обнаруживается присутствие эшерихий, это может свидетельствовать о том, что загрязнение БГКП было произведено недавно. Цитробактер или энтеробактер указывают на то, что с момента образования бактерий прошло несколько недель.
Важность проведения регулярных проверок на наличие микроорганизмов
Правила, направленные на создание регламентирующих документов, в том числе МУ и СанПиН, разрабатывались на основании данных проводимых исследований микроорганизмов. Они необходимы для определения частоты проверок, рекомендованных методик, объектов, которые подвергаются более пристальному контролю. Учитывая важность обеспечения безопасности населения, легко объяснить скрупулезность действий в СанПиН и МУ.
Полный и актуальный прайс-лист на услуги
Узнать цены
Фекальные микроорганизмы, которые попадают в окружающую среду из желудочно-кишечного тракта, относятся к одной из наиболее распространенных категорий. Второй категорией является оральная – она представлена микроорганизмами, которые обитают в полости рта. Большинство БГКП по признакам схоже с Escherichia coli – это распространенный представитель группы в связи с легкостью дифференцирования. Также она отличается быстрейшими темпами роста и поэтому служит определителем того, что загрязнение произошло недавно.
В чем опасность БГКП для организма?
БГКП может вызвать острую кишечную инфекцию, проявляемую в виде отравления. Путем распространения заболевания может быть вода, которой моют посуду после употребления пищи, сама посуда или еда. Компоненты постоянно контактируют между собой, за счет чего производится осеменение и последующая передача к здоровому человеку.
Проведение анализа
Следует помнить, что не во всех случаях возбудитель может стать возбудителем заболеваний – подобное происходит при превышении предельно допустимой концентрации микроорганизмов. В нормативных документах указывается безопасный уровень, превышение которого и может вызвать различные осложнения. Обнаружение возбудителей осуществляется при помощи материалов, которые могут потенциально содержать бактерии или контактировать с больным.
Определение безопасности может проводиться в трех направлениях:
- анализ на наличие бактерий;
- установление количества;
- диагностика биохимических характеристик.
Первые варианты используются повсеместно, третий – при необходимости детального изучения возбудителя. В зависимости от целей исследования процедуры, которые необходимы для анализа, могут отличаться.
- Для выявления бактерий потребуется осуществить посев образца в пробирку, в которой будет находиться богатая на лактозу среда. Взятые образцы выдерживаются при температуре 37 C до 48 часов. В подобных условиях производится выращивание колоний группы кишечной палочки.
- Для определения числа бактерий такой же объем материала наносится на специальные чашки Петри. После проведения процедуры инкубации в термостате происходит рост колонии – в данном случае клетки получают название колониеобразующих единиц. С помощью подсчета КОЕ можно определить количество бактерий в 1 л.
- Биохимические свойства устанавливаются при помощи пробирок со средой Гиса. Добавляя необходимые компоненты, можно определить уровень сахаролитической активности микроорганизмов.
В отдельных случаях может использоваться ускоренный метод выявления бактерий группы кишечных палочек. После первичной обработки образца отделяется небольшой фрагмент, который помещается в стерильную пробирку вместе с комочком стерильной фильтровальной бумаги. Далее в емкость наливается среда ХБ или Хейфеца. Пробирка укладывается в термостат на период от 12 до 14 часов. В случае, если в пробе имеются БГКП, среда меняет свой цвет.
Особенности отбора проб
Забор материалов для исследования производится на основании методических указаний и стандартов для каждого продукта. Смыв с рук обследуемого производится при помощи увлажненного средой ватного тампона. Чтобы добиться более точной оценки, требуется протереть каждую ладонь и пальцы не менее пяти раз, также не забыв о межпальцевых промежутках.
При изучении стаканов протирается внутренняя поверхность и верхний наружный край. Во время взятия смывов с санитарной одежды выборочно протирается четыре 25-сантиметровые – чаще всего это касается нижней части рукавов, а также фрагментов передних пол. Отметим, что стерильные тампоны заготавливаются лабораторией заблаговременно, устанавливаясь в пробирки с ватными пробками.
Далее отобранная проба отправляется в центр, помещаясь перед этим в герметично закрытую емкость. При перевозке помимо оптимальных условий хранения, которые препятствуют повреждению образцов, также важно обеспечивать низкий уровень температуры. В связи с этим не рекомендуется осуществлять забор образцов самостоятельно – этим должны заниматься специалисты. В лаборатории БГКП из емкости укладывается в раствор с использованием вибрирующего аппарата. Для проведения исследований достаточно 1 см³ жидкости.
В каких случаях нужно проводить исследования?
Проверка продуктов, а также одежды, посуды и оборудования чаще всего производится с целью оценки санитарно-гигиенического состояния организаций общественного питания, пищевой промышленности, а также больниц, лечено-профилактических и детских учреждений. В зависимости от цели исследования может проверяться наличие БГКП, их тип и общее число.
Определение БГКП в лаборатории «НОРТЕСТ»
Аккредитованная испытательная лаборатория «НОРТЕСТ» оснащена всем необходимым оборудованием для проведения микробиологических исследований воды и окружающей среды на предмет наличия БГКП и уровня концентрации. Анализу будет подвергаться широкий спектр показателей, а точность и достоверность результатов помимо новейшего оборудования также обеспечит квалифицированный персонал.
Источник