Энтеровирусная кишечная инфекция анализы

Анализ на энтеровирусную инфекцию является одним из распространенных лабораторных методов в силу частого заражения этим возбудителем. Для уточнения диагноза используются различные способы диагностики.

Основные методы диагностики

Чтобы подтвердить диагноз энтеровирусной инфекции, применяют методы лабораторной диагностики: специфические вирусологические методики.

Инфекцию может вызвать содержащий рнк энтеровирус или семейство аденовирусов, которые поражают как слизистую оболочку кишечника, так и ткани верхних дыхательных путей, глаз. По этой причине материалом для исследования является не только кал, но и смывы с носоглотки и конъюнктивы.диагностика

Если подозревается энтеровирусная инфекция, диагностика проводится в первые дни от начала заболевания, когда концентрация вирусов является наибольшей.

Чтобы дифференцировать инфекцию применяются такие серологические методы:

  • определение иммуноглобулинов к вирусу;
  • выделение аденовирусов в кале;
  • ПЦР-диагностика;
  • иммунофлуоресцентный метод.

Особенностью при инфицировании аденовирусной инфекцией является длительное выделение возбудителя и вирусоносительство после исчезновения симптомов болезни. По этой причине через 2-3 недели после заболевания обследование необходимо повторить, что важно для профилактики повторного заражения в коллективе. Инфицированию больше подвержены дети в возрасте до 14 лет.

Выявление антител

Определение антител (иммуноглобулинов) к аденовирусам проводится методом иммуноферментного анализа (ИФА). Такая диагностика основана на способности организма вырабатывать защитные белки (антитела, иммуноглобулины) в ответ на заражение. С помощью специально подобранных реактивов можно определить наличие антител к определенному типу возбудителя. Кроме диагностики аденовирусной инфекции в целом, можно определить серотип возбудителя.

Для сдачи анализа в стерильную емкость набирается венозная кровь. Забор материала необходимо проводить натощак, а интервал после приема пищи должен быть не меньше 8 часов. За 24 часа до исследования нельзя принимать алкоголь. Для профилактики искажений результата не стоит проводить анализ после физиотерапевтических процедур, флюорографии и других рентгенологических исследований.

Позитивный результат подтверждается наличием иммуноглобулинов класса IgG. Эти антитела образуются в крови человека разу после заражения, а в периоде острой фазы болезни концентрация их резко повышается.

Метод парных сывороток – это диагностический способ определить острую фазу энтеровирусной инфекции в течение первых 2-х недель от заражения. Для этого исследуется динамика нарастания концентрации антител с интервалом от 10 дней до 2 недель. В случае значительного роста подтверждается наличие свежей инфекции. Чувствительность такого метода составляет 90%.

Кроме того, рост IgG отмечается при реактивации латентной инфекции. По мере выздоровления концентрация антител в крови падает, но они циркулируют еще продолжительно время, указывая на перенесенную инфекцию.

Стойкого иммунитета к энтеровирусной инфекции нет, а при повторном заражении отмечается повторный стремительный рост специфических IgG.

Анализ кала

Энтеровирусы и аденовирусы вызывают кишечные формы заболевания или по мере развития инфекции она распространяется на слизистую оболочку кишечника, вызывая характерные симптомы.

Из-за недостаточного выполнения норм личной гигиены инфекцией чаще заражаются маленькие дети, у которых распространенным путем передачи является фекально-оральный.

К высокой температуре, явлениям катара верхних дыхательных путей и конъюнктивита присоединяется учащенное испражнение. Больного беспокоит диарея, водянистый светлый кал, боли в животе.боль

Такие симптомы являются показанием для лабораторной диагностики энтеровируса. Исследование необходимо проводить не позже 3 – 5 дня после появления симптомов. Через неделю болезни концентрация энтеровируса в кале уменьшается, что может снижать качество диагностики.

Тем не менее после выздоровления переболевший является источником инфекции, так как отмечается вирусоносительство, а возбудитель продолжает выделяться с калом.

Анализ также проводится для выделения конкретного возбудителя – для человека патогенными считаются несколько серотипов вируса.

Перед сдачей анализа необходимо помочиться, чтобы исключить попадание мочи в исследуемый материал. Для диагностики необходим свежий стул не более 15 г. Его набирают в специальный контейнер. Анализ должен пройти лабораторную диагностику не позже чем через 3 часа после забора материала.

Перед сбором кала нельзя применять любые препараты, влияющие на работу кишечника (слабительные или закрепляющие), а также делать клизмы. Прием дополнительных препаратов накануне забора материала, примеси мочи или других биологических жидкостей могут повлиять на конечный результат, сделав его недостоверным.

Результатом диагностики является положительный или отрицательный ответ. В первом случае врач может подтвердить диагноз и приступить к целенаправленному лечению болезни. В случае негативного результата, но при продолжающихся симптомах необходимо повторное проведение исследования.

Метод ПЦР

Диагностика энтеровирусной инфекции современной методикой цепной полимеразной реакции является одним из наиболее достоверных и быстрых способов.

Этот тест основан на обнаружении вирусной ДНК в крови человека или мазке из зева. С его помощью возможна как диагностика острых форм болезни, так и определение вирусоносительства.

Анализ на энтеровирус методом ПЦР является “золотым стандартом” вирусологической диагностики. Этим способом проводится дифференциальная диагностика энтеровирусной инфекции.

Больной не нуждается в специальной подготовке, однако перед забором материала необходимо следовать некоторым правилам:

  • исследование рекомендовано проводить натощак и с интервалом не менее 8 часов после еды;
  • желательно не принимать какие-либо препараты за сутки до сдачи крови;
  • отказ от приема алкоголя за день до исследования и курения не менее чем за час до забора крови;
  • отказ от физических и психических перенапряжений накануне диагностики;

Нежелательно осуществлять забор крови после физиотерапевтического лечения или инструментальных исследований. В случае проведения биопсии следует сделать паузу на несколько дней.

Читайте также:  Кишечная инфекция при беременности в третьем триместре

Если доктор назначил проведение повторного лабораторного исследования, желательно делать это в одинаковых условиях: в той же лаборатории, в одно и то же время.назначение

Иммунофлуоресцентный метод

Метод иммунофлюоресценции основан на реакции со специальными реагентами, которые помечены красителем. Он применяется в рамках ранней диагностики энтеровирусной инфекции. Для исследования проводят соскоб со слизистой носа.

При определении энтеровирусов в организме человека во время микроскопии мазок подсвечивают ультрафиолетовыми лучами. Этот метод является способом экспресс-диагностики инфекции.

Специальные реактивы содержат антитела против энтеровирусов. При связывании антигенов и антител образовавшиеся комплексы становятся хорошо видимыми в ультрафиолетовом свете.

Такой тест имеет три разновидности:

  • прямой;
  • непрямой;
  • конкурентный.

Для проведения прямого способа диагностики к материалу анализа добавляют люминесцентный реактив. Образовавшиеся комплексы рассматривают через флуоресцентный микроскоп. При том анализе определяют наличие вирусных антигенов.

Тест при непрямой реакции определяет наличие антител в собранном материале. Реагентом выступает специальный антиген, который взаимодействует с антителами, выработанными в организме человека.

При конкурентном способе исследуют наличие вирусных антигенов. Отличие способа состоит в добавлении двух реагентов: антител и специальных меченых антигенов, которые конкурируют в реакции связывания.

Заключение

Точное диагностирование энтеровирусной инфекции необходимо для дифференциального диагноза и правильного назначения терапии. Современные методы позволяют сделать это быстро и качественно.

( 1 оценка, среднее 5 из 5 )

Источник

Метод определения
ПЦР в реальном времени (RT-PCR).

Исследуемый материал
Кал

Тест используют в целях лабораторного подтверждения энтеровирусной инфекции (выявляется общая для различных видов и серотипов энтеровирусов нуклеотидная последовательность).

Энтеровирусы – род РНК-содержащих вирусов, который относится к семейству пикорнавирусов (Picornaviridae). Энтеровирусной инфекции подвержены лица всех возрастов, но наиболее восприимчивы к ней дети. Эта инфекция часто может оставаться нераспознанной, поскольку в большинстве случаев протекает бессимптомно (у 85% инфицированных лиц) либо в легкой или среднетяжелой форме, напоминающей обычную простуду (в 12-14% случаев). Тяжелое течение заболевания (спектр клинических форм см. ниже) отмечают у 1-3% инфицированных. Потребность в лабораторном подтверждении энтеровирусной инфекции для отличия от других видов патологии возникает при тяжелых формах заболевания (в том числе менингитах, энцефалитах) или при эпидемических вспышках инфекции. 

Среди энтеровирусов выделяют различные виды и серотипы. Заболеваемость, связанная с полиомиелитными энтеровирусами (полиовирусами), во многих странах, включая Россию, практически ликвидирована благодаря эффективной вакцинации. Среди неполиомиелитных энтеровирусов потенциальную опасность для человека представляют 70 серотипов.

ВидЧисло серотиповСеротипы
A16Коксаки A2–8, 10, 12, 14, 16 Энтеровирусы 71, 76, 89–91
B41Коксаки A9, Коксаки B1–6 ЕСНО 1–7, 9, 11–21, 24–27, 29–33 Энтеровирусы 69, 73–75, 77, 78
C11Коксаки A1, 11, 13, 15, 17–22, 24
D2Энтеровирусы 68 и 70

Пик заболеваемости, связанной с энтеровирусами, приходится на лето и осень. Основной механизм передачи – фекально-оральный (включает пищевой, водный и бытовой (через предметы обихода) пути), возможен воздушно-капельный путь передачи инфекции. Относительная роль каждого из путей передачи может варьировать в зависимости от разновидности энтеровирусов, сроков после начала болезни, жизненных условий. Возможна вертикальная (трансплацентарная) передача инфекции от матери к плоду во время беременности. 

Размножение вирусов начинается в эпителии желудочно-кишечного тракта. Из желудочно-кишечного тракта вирусные частицы попадают в кровоток и поражают внутренние органы, где проходит вторая волна размножения вируса. Энтеровирусы можно обнаружить в секретах дыхательных путей и фекалиях инфицированных лиц, иногда – в крови и спинномозговой жидкости. 

Особенностью энтеровирусной инфекции является то, что различные клинические формы заболевания могут быть обусловлены представителями одного серотипа, а сходные клинические проявления могут вызывать разные серотипы вирусов. Лишь для некоторых серотипов энтеровирусов характерен определенный комплекс симптомов, который не наблюдается при инфицировании другими разновидностями. Многие из возможных клинических проявлений не являются специфичными для энтеровирусной инфекции и встречаются при других инфекционных заболеваниях. 

Заболевания, вызываемые энтеровирусами, можно разделить на две группы: 

  1. Менее опасные формы заболевания: трехдневная лихорадка с сыпью или без, герпангина, плевродиния, везикулярный фарингит, конъюнктивит, увеит, гастроэнтерит. 
  2. Потенциально тяжелые формы заболевания: менингит, энцефалит, острый паралич, септикоподобные состояния у новорожденных, миокардит, перикардит, гепатит, хронические инфекции у лиц с иммунодефицитами. 

Основные методы лабораторной диагностики энтеровирусной инфекции – выделение энтеровирусов в культуре клеток и обнаружение РНК энтеровирусов методом ПЦР. По сравнению с методом выделения и идентификации вируса с применением культуры клеток, ПЦР-исследование обладает большей чувствительностью и требует меньших временных затрат. 

Присутствие энтеровирусов в фекалиях не является специфичным только для периода острых клинических проявлений, вирусная РНК в пробах кала может обнаруживаться до одного месяца и более от начала инфицирования. Следует учитывать, что, в соответствии с указаниями Роспотребнадзора, обнаружение РНК энтеровирусов в образцах фекалий (в отсутствие эпидемической вспышки) не может служить основанием для лабораторного подтверждения этиологии серозных менингитов, заболеваний верхних дыхательных путей, диарейных инфекций и лихорадочных заболеваний неясной этиологии вследствие высокой частоты носительства энтеровирусов в популяции.

Читайте также:  Острая кишечная инфекция у ребенка диета

Аналитическая чувствительность (фекалии) – 1х104 ГЭ/мл.

Литература

  • Ботвиньева В.В., Намазова-Баранова Л.С., Гордеева О.Б., Ботвиньев О.К., Коноплева Т.Н. Современные возможности диагностики, профилактики и лечения энтеровирусной инфекции Коксаки у детей. Педиатрическая фармакология. – М. 2012;9(3):40-45. 
  • Инфекционные болезни у детей. Под ред. Д. Марри. – М.: Изд. «Практика». 2006:928. 
  • Эпидемиологический надзор и профилактика энтеровирусных (неполио) инфекций: Методические указания. МУ 3.1.1.2363-08. Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. – М. 2008. 
  • Kupila L., Vuorinen T., Vainionpõā R., Marttila R.J., Kotilainen P. Diagnosis of Enteroviral Meningitis by Use of Polymerase Chain Reaction of Cerebrospinal Fluid, Stool, and Serum Specimens. Clinical Infectious Diseases. 2005;40(7):982-987.
  • Материалы фирмы-производителя реагентов.

Источник

РНК энтеровируса – один из основных анализов, позволяющих определить наличие вируса в образце кала. В ходе исследования используется метод полимеразной цепной реакции, он позволяет выявлять генетический материал энтеровируса и диагностировать инфицирование еще при первых проявлениях клинических симптомов. К достоинствам данного метода выявления заражения энтеровирусом относится высокая чувствительность и специфичность, минимальное время на проведения анализа. Поскольку метод выявляет единый для всех энтеровирусов фрагмент РНК, с его помощью может выделяться любой из более чем семидесяти представителей вирусов этой группы.

Анализ на РНК энтеровируса

используют в диагностике заболеваний, ассоциированных с вирусами этой группы, в частности, менингита, полиомиелита, миоперикардита, герпетической ангины.

Показаниями для назначения анализа РНК энтеровируса служит выявление таких симптомов, характерных для спровоцированных вирусом заболеваний. При подозрениях на менингит это:

  • продолжительной и сильной головной болью,
  • повышением температуры,
  • боязнью света,
  • слабостью затылочных мышц.
  • При симптомах герпетической ангины, характерными признаками является:
  • резкое повышение температуры,
  • тошнота и рвота,
  • характерные высыпания на миндалинах,
  • болевые ощущения при глотании.

Анализ проводят при появлении симптомов экзантемы (сыпи) на слизистой рта, кожном покрове туловища, кистей и стоп.

РНК энтеровируса проверяют у пациентов с подозрениями на миоперикардит, появление одышки, боли в грудной клетке, периферических отеков и нарушений сердечного ритма, а также при симптомах полиомиелита, таких как лихорадка, головные боли, тошнота, нарушение глотания, тремор либо паралич конечностей.

Результата анализа имеет качественное выражение, референсным показателем считается отрицательный результат.

Анализ на энтеровирусную инфекцию образца биоматериала пациента – это верный способ обнаружить в его организме РНК вируса. Для этого используется высокоточная методика полимеразной цепной реакции (ПЦР). Она способна выявить инфицирование организма на ранней стадии и тем самым ускорить процесс выздоровления.

Проведение ПЦР на энтеровирусную инфекцию и показания к анализу

Сдать кровь или кал на энтеровирус рекомендуется при наличии в организме специфической симптоматики, а именно:

  • боязни яркого света;
  • сильной головной боли;
  • слабости мышц затылка;
  • высокой температуры;
  • тошноты и рвоты;
  • высыпаниях на миндалинах;
  • затрудненном глотании.

Сдать мазок из зева на энтеровирусную инфекцию рекомендуется также при наличии экзантемы (сыпи) на коже тела, стоп, кистей и слизистой оболочке ротовой полости. На энтеровирусы анализ назначается врачом при подозрении на полиомиелит и миоперикардит. Первое заболевание сопровождается тремором или параличом конечностей, тошнотой, рвотой, сильными головными болями и высокой температурой. Второе – периферическими отеками, одышкой, нарушения в работе сердца и болями в области грудной клетки.

Пройти обследование на энтеровирусную инфекцию вы можете в нашем центре. По вопросам подготовки к анализу и срокам получения результатов звоните по номеру телефона, указанному на сайте.

Источник

[09-075]
Enterovirus, РНК [ПЦР]

625 руб.

Выявление вирусов рода Enterovirus (Echovirus, Сoxsackievirus, Poliovirus), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Синонимы русские

Энтеровирусы, энтеровирусная инфекция [полимеразная цепная реакция].

Синонимы английские

EV, RNA [polymerase chain reaction, PCR].

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Кал, ликвор.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Общая информация об исследовании

Enterovirus – это группа РНК-содержащих вирусов, характеризующихся нуклеокапсидом в форме икосаэдра и отсутствием оболочки. Они относятся к семейству Picornaviridae, в которое также входят возбудитель вирусного гепатита А и риновирус.

Род Enterovirus объединяет несколько десятков различных вирусов, являющихся возбудителями целого спектра заболеваний человека: полиомиелита (Poliovirus), миокардита и перикардита (Сoxsackievirus В), вирусной пузырчатки полости рта и конечностей, герпетической ангины, асептического менингита и энцефалита (Сoxsackievirus A, Echovirus), а также более редких болезней. Для всех вирусов рода Enterovirus характерен схожий патогенез: попадание возбудителя в желудочно-кишечный тракт (фекально-оральный путь передачи), репликация в эпителиальных клетках слизистой оболочки ЖКТ и гематогенное распространение с поражением различных органов и тканей. Учитывая эти особенности заражения, основными биологическими средами для выявления Enterovirus являются отделяемое носоглотки, кал и ликвор. Как правило, острая инфекция Enterovirus протекает бессимптомно или в доброкачественной форме, а клиническая картина заболевания развивается лишь спустя некоторое время после первичного заражения. Эту особенность следует учитывать при выборе вида биоматериала, направляемого на анализ.

Читайте также:  Ротовирусная кишечная инфекция и алкоголь совместимость

Для выявления возбудителя при подозрении на Enterovirus-ассоциированную инфекцию применяют серологические тесты, выделение вируса в культуре клеток и молекулярную диагностику.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в ликворе) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Она характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, а также позволяет получить результат в более короткие сроки по сравнению с большинством других анализов, что делает ее незаменимым инструментом для своевременной диагностики Enterovirus-ассоциированных инфекций.

ПЦР является “золотым стандартом” исследования ликвора для диагностики Enterovirus-ассоциированного менингоэнцефалита. Чувствительность такого анализа составляет 95-97 %, специфичность – 97-100 %. Благодаря этим преимуществам ПЦР заменила другой прямой метод идентификации возбудителя – выделение вируса в культуре клеток эмбриона. При этом исследование ликвора, полученного в первые 2 дня развития симптоматики менингоэнцефалита, характеризуется меньшей чувствительностью. Следует отметить, что вероятность обнаружить вирус при анализе нестерильных биологических сред (отделяемого носоглотки, кала) меньше, что необходимо учитывать при отрицательном результате анализа у пациента с клиническими признаками Enterovirus-ассоциированной инфекции. Большая частота ложноотрицательных реакций связана с полной элиминацией вируса из клеток ЖКТ к моменту развития симптомов заболевания (период репликации вируса в эпителии глотки составляет от 2 дней до 2 недель, в эпителии кишки – до 3 месяцев). Также ниже и специфичность метода при исследовании нестерильных сред, что связано с возможным “здоровым носительством” Enterovirus, сопутствующим клинически выраженному заболеванию, но не являющимся ее причиной.

ПЦР основана на непосредственном выявлении РНК вируса и может быть применена для выявления Enterovirus на раннем этапе болезни, что отличает ее от серологических (непрямых) методов, требующих около 2-4 недель для оценки динамики уровня выявляемых специфических антител. Однако по этой же причине ПЦР не позволяет различить острую и хроническую энтеровирусную инфекцию.

Благодаря тому, что в ПЦР выявляется общий для всех Enterovirus фрагмент РНК, она позволяет определить наличие любого представителя этого рода. Современные серологические методы разработаны только для 11 из более чем 70 вирусов рода Enterovirus. Однако по этой же причине с помощью ПЦР нельзя различить вирусы рода Enterovirus между собой, что имеет определенное значение в дифференциальной диагностике Enterovirus 71 – и Сoxsackievirus type A 16 – ассоциированного поражения нервной системы.

Диагностиказаболеваний, вызванных вирусами рода Enterovirus, представляет определенные трудности и требует проведения дополнительных лабораторных, а также инструментальных исследований.

Для чего используется исследование?

Для диагностики Enterovirus-ассоциированных инфекций:

  • менингита;
  • герпетической ангины;
  • вирусной пузырчатки полости рта и конечностей;
  • миоперикардита;
  • полиомиелита.

Когда назначается исследование?

При симптомах:

  • менингита (головная боль, раздражительность, лихорадка, фотофобия, тошнота и не приносящая облегчения рвота, ригидность затылочных мышц);
  • герпетической ангины (острое начало заболевания, лихорадка с температурой 39-40 ºС, головная боль, тошнота, рвота, болезненная шейная лимфаденопатия, везикулезная сыпь на слизистой оболочке миндалин, мягкого и твердого неба, боль при глотании);
  • вирусной пузырчатки полости рта и конечностей у детей (лихорадка, кашель, везикулезная сыпь на коже кистей, стоп и на слизистой оболочке рта);
  • миоперикардита (одышка, загрудинная боль, усиливающаяся на вдохе и ослабевающая при наклоне вперед, а также периферические отеки и нарушения ритма сердца);
  • полиомиелита (лихорадка, головная боль, тошнота, боль в животе, парез или паралич конечностей или группы мышц, нарушения глотания, пронации и др.).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

  • Enterovirus-ассоциированная инфекция;
  • носительство Enterovirus.

Отрицательный результат:

  • отсутствие Enterovirus в исследуемом биоматериале.

Что может влиять на результат?

  • Применение рибавирина и плеконарила может приводить к получению ложноотрицательного результата.
  • Применение противовирусного иммуноглобулина не влияет на результат исследования.
  • Анализ ликвора в первые 2 дня менингоэнцефалита, а также исследование отделяемого носоглотки и кала характеризуются большей частотой ложноотрицательных результатов.



Также рекомендуется

  • Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
  • Глюкоза в ликворе
  • Белок общий в ликворе
  • Креатинкиназа MB
  • Креатинкиназа общая
  • Cytomegalovirus предранний белок IEA, IgM, IgG
  • Influenza virus A/B (вирусы гриппа А/В), РНК [реал-тайм ПЦР]
  • ПЦР-диагностика “клещевых” инфекций
  • Полное серологическое обследование на “клещевые” инфекции
  • Микроскопическое исследование мазка со слизистой оболочки носа
  • Streptococcus pyogenes, ДНК [реал-тайм ПЦР]

Кто назначает исследование?

Инфекционист, невролог, педиатр, стоматолог, врач общей практики.

Литература

  • Sawyer MH. Enterovirus infections: diagnosis and treatment. Semin Pediatr Infect Dis. 2002 Jan;13(1):40-7. Review.
  • Rhoades RE, Tabor-Godwin JM, Tsueng G, Feuer R. Enterovirus infections of the central nervous system. Virology. 2011 Mar 15;411(2):288-305. Epub 2011 Jan 20.
  • Ooi MH, Wong SC, Lewthwaite P, Cardosa MJ, Solomon T. Clinical features, diagnosis, and management of enterovirus 71. Lancet Neurol. 2010 Nov;9(11):1097-105.
  • Smalling TW, Sefers SE, Li H, Tang YW. Molecular approaches to detecting herpes simplex virus and enteroviruses in the central nervous system. J Clin Microbiol. 2002 Jul;40(7):2317-22.
  • Hsiung GD, Wang JR. Enterovirus infections with special reference to enterovirus 71. J Microbiol Immunol Infect. 2000 Mar;33(1):1-8.

Источник