Кишечная палочка на среде симмонса
Грамотрицательные палочки
1. селективное обогащение (накопление):
· жидкая среда Кесслера с поплавком (с лактозой): культивирование – (36±1)°С, для E.coli используют температуру (43±1)°С в течение 24-48 ч. Проверяется сбраживание лактозы и образование газа. На среде Кесслера кишечная палочка дает обесцвечивание и помутнение среды связи с подкислением среды, и образование газа в поплавке.
· жидкая элективная среда Кода: культивирование – 37°С 18-24 ч. Проверяется сбраживание лактозы и образование газа. Признаком роста лактозоположительных энтеробактерий (БГКП, E. coli) является изменение цвета среды с темно-зеленого до ярко-желтого.
2. плотные дифференциально-диагностические среды:
· среда Эндо: культивировать – (37±1)°С в течение 18-20 ч. На среде Эндо Е.соli колонии имеют круглую форму, ровный, четко очерченный край, матовую поверхность, малиново-красный темно-красный цвет, который зависит от способности культуры расщеплять лактозу с образованием кислоты, с металлическим блеском. Колонии от бледно-розового до темно-красного цвета с нечетким металлическим блеском. Диаметр колоний 1,5-2,5 или 2,0-3,0 мм.
· среда Левина: культивировать – (37±1)°С в течение 24-48 ч. Колонии кишечной палочки темно-синего (темно-фиолетового) цвета с зеленым металлическим блеском (или без него) диаметром 1,5-2,0 мм, в остальном они не отличаются от колоний кишечной палочки на среде Эндо.
· скошенный РПА (МПА): культивировать – 37°С 18-20 ч. На поверхности агара кишечная палочка образует влажный, блестящий налет сероватого цвета, слегка опалесцирующий в проходящем свете.
3. морфология клеток:
· грамотрицательные палочки.
4. биохимические тесты:
E. coli образует индол.
Оксидазоотрицательные бактерии пересевают на поверхность МПА (РПА) или среды, приготовленной из ПА. Посевы инкубируют до появления видимого роста при температуре (36±1)°С. У оксидазоотрицательных грамотрицательных культур (палочки размером 1,1×1,5×2 6 мкм), выросших в пересевах по 7.3, определяют возможность образования индола, ацетоина, сероводорода, утилизации цитрата, интенсивность ферментации углеводов с образованием кислоты, ферментацию сорбита, глюкозы и лактозы.
· способность образовывать индол: культуру высевают в пробирку с бульоном Хоттингера или МПБ (РПБ) с триптофаном. Под пробку в пробирку помещают полоску индикаторной бумажки. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24 ч. Если за время инкубирования посевов в среде накапливается индол, то желтый цвет индикаторной бумажки меняется на цвет от сиренево-розового до интенсивного малинового. Образование индола можно определить с помощью реактивов Эрлиха и Ковача. Для этого к 5 см 24-часовой культуры добавляют 1 мл одного из реактивов. Образование красного слоя на поверхности культуральной жидкости указывает на положительную реакцию. E.coli образует индол.
E. coli не образует ацетоин.
· способность образовывать ацетоин (реакция Фогес-Проскауэра): культуру высевают в пробирки со средой Кларка. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 48 ч. После инкубирования посевов к 1 мл отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 мл раствора 1-нафтола и 0,2 мл раствора гидроокиси калия. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Проявление розового окрашивания через 15-60 мин. указывает на положительную реакцию. E.coli не образует ацетоин.
E. coli не утилизирует цитрат.
· способность утилизировать цитрат: культуру высевают в пробирки со средой Козера или на поверхность среды Симмонса. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24-48 ч. Изменение оливково-зеленого цвета сред на васильковый, синий указывает на положительную реакцию.
E.coli интенсивно ферментирует углеводы (реакция с метил-рот положительная).
· определение интенсивности ферментации углеводов с образованием кислоты (реакция с метил-рот): культуру высевают в пробирки с глюкозо-фосфатным бульоном или средой Кларка или используют посевы после отбора 1 мл культуральной жидкости для проведения реакции Фогес-Проскауэра. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 48 ч. К 5 мл культуральной жидкости прибавляют 5-10 капель реактива Кларка. Появление через 1 мин. красного цвета культуральной жидкости указывает на ферментацию углеводов до рН ниже 5,0.
E.coli ферментирует глюкозу, лактозу и сорбит.
· определение ферментации сорбита, глюкозы и лактозы: культуру высевают в среды Гисса с сорбитом или глюкозой, или лактозой. Посевы инкубируют при температуре (36±1)°С в течение 24 ч, а на среде Гисса с лактозой при температуре (44±1)°С в течение 24 ч. При ферментации глюкозы образуется газ. Ферментацию глюкозы можно учитывать в засеянных косяках ТСА или среды Клиглера по изменению цвета столбика среды и образованию в нем газа. Ферментацию лактозы учитывают по изменению цвета скошенной поверхности среды Клиглера. Ферментацию сорбита учитывают по изменению цвета среды. У культур типичных для Е.соli по всем изученным признакам, но не ферментирующим сорбит, изучают возможность ферментации целлобиозы на среде Гисса с целлобиозой, при температуре (36±1)°С в течение 24 ч.
Е.соli не образует сероводород.
· определение образования сероводорода: образование сероводорода учитывают в посевах на среду Клиглера или ТСА после инкубирования посевов при температуре (36±1)°С в течение 24 ч. Почернение в столбике среды указывает на образование сероводорода.
Идентификация Salmonella
Salmonella грамотрицательные палочки с закругленными концами.
1. первичное неселективное накопление (обогащение):
· ЗПВ (забуференная пептонная вода): навеску продукта засевают в среду. Соотношение продукта и ЗПВ 1:9. Рост проявляется в помутнении среды. Культивирование – (36±1)ºС 18±2 ч.
· магниевая среда (хлормагниевая): Засевают непосредственно продукт. Культивирование – (36±1)ºС 24-48 ч.
2. селективное обогащение:
· жидкая элективная среда Кода: культивировать. Признаком роста лактозоотрицательных энтеробактерий (сальмонелл) является помутнение среды без изменения цвета.
· магниевая среда (хлормагниевая): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – (36±1)ºС 24-48 ч.
· селенитовая среда (селенитовый бульон Лейфсона): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – 35ºС 18-24 ч.
· среда Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – (41,5±1)ºС 24±3 ч. Рост проявляется диффузным помутнением среды.
· тетратионатная среда Мюллер-Кауфман (МКТ-бульон): засевают культуру, полученную после предварительной инкубации. Культивирование – (43±1)ºС 24-48 ч. или (37±1)ºС 24±3 ч.
3. плотные дифференциально-диагностические среды:
· питательная среда Эндо: низкоселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 18-20 ч. На среде сальмонеллы круглые бесцветные или слегка розоватые, прозрачные. Образование полупрозрачных бесцветных или бледно-розовых колоний свидетельствует о принадлежности микроорганизмов, давших рост на накопительных питательных средах, к лактозоотрицательным энтеробактериям, в том числе сальмонелл.
· среда Плоскирева (или бактоагар Плоскирева): среднеселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 18-20 ч. На средах колонии сальмонелл бесцветные прозрачные, но более плотные, чем на среде Эндо. Бесцветные, нежные, гладкие, круглые диаметром 1,0-2,0 мм.
· среда ВСА (висмут-сульфит агар): высокоселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 24-48 ч. На ВСА колонии сальмонеллы имеют черный цвет с характерным сероватым металлическим блеском в виде ободка, а также зеленоватого цвета с темным центром и темно-зеленым ободком и с пигментированием (потемнением) среды под колониями.
· среда Левина: низкоселективная среда. Культивирование – (37±1)ºС 24-48 ч. На среде колонии сальмонеллы прозрачные, слабо-розовые или розовато-фиолетовые.
· ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-агар): культивирование – (37±1)ºС 24-48 ч. Колонии сальмонелл имеют черный центр и слегка прозрачную зону красноватого цвета, что принадлежит цвету индикатора. Бактерии рода сальмонелл сероводородотрицательные образуют на среде розовые колонии с темным розовым центром. Лактозоположительные бактерии рода сальмонелла на среде дают желтые колонии с почернением или без него. Круглые, блестящие, бесцветные с черным центром или без него, диаметром 1,0-3,0 мм.
· бриллиантовый зеленый агар: культивирование – (37±1)ºС 48 ч. На среде сальмонеллы образуют красноватые или розовые, почти белые колонии (их цвет зависит от штамма и срока культивирования). Лактозо- и сахарозоположительные сальмонеллы образуют зеленоватые колонии, окруженные яркой желто-зеленой зоной.
· сальмонелла-шигелла агар (SS-агар): культивировать 37°С 18-20 ч. Колонии бесцветные, диаметром 1-2 мм.
· среда Плоскирева: культивировать 37°С 18-20 ч. Колонии малинового цвета, круглые, выпуклые, гладкие диаметром 1,5-2,5 мм.
· скошенный РПА или ПА: Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. Рост прозрачный по штриху.
4. морфология клеток:
· сальмонеллы грамотрицательные палочки с закругленными концами.
5. биохимические тесты:
Salmonella ферментирует глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирует лактозу и сахарозу.
· способность ферментировать сахара (лактозу, глюкозу и сахарозу): на трехсахарном агаре (ТСА, TSI-агар), среде Олькеницкого (3 сахара с мочевиной) среде Клиглера (2 сахара): Посев осуществляется петлей на скошенную поверхность и уколом в столбик с помощью бактериальной иглы. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. Пожелтение скошенной части среды указывает на ферментацию лактозы или сахарозы, или обоих сахаров. Красная или неизменившая цвета среда говорит о лактозо- и сахарозоотрицательных сальмонеллах. Пожелтение столбика среды указывает на ферментацию глюкозы. Красный или неизменившийся цвет – глюкоза отрицательная. Столбик с разрывом агара или пузырьками газа – образование газа. Отсутствие разрывов и пузырьков – газ не образуется. Агар Клиглера – по скошенной поверхности учитываю только ферментацию лактозы.
Salmonella образует сероводород.
· способность образовывать сероводород: Посев осуществляется петлей на скошенную поверхность и уколом в столбик ТСА, среду Олькеницкого, Клиглера с помощью бактериальной иглы. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. Почернение среды в столбике указывает на образование сероводорода.
Salmonella не расщепляет мочевину.
· способность расщеплять мочевину: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают штрихом на поверхность агара с мочевиной (агар Кристенсена с мочевиной). Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. При положительной реакции – расщеплении мочевины с выделением аммония цвет среды фенолового красного меняется от розового до светло-вишневого. Для уреазоположительных бактерий реакция часто становится видимой после 2 ч. инкубации.
Salmonella не образует ацетоин (реакция Фогес-Проскауэра отрицательная).
· способность образовывать ацетоин: реакция Фогес-Проскауэра. Культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают в МПБ (РМБ) с глюкозой или суспендируют петлей в стерильной пробирке с 3 мл VP среды. Культивирование – (36±1)ºС 48 ч. После культивирования к 1 мл отобранной культуральной жидкости прибавляют 0,6 мл раствора α-нафтола и 0,2 мл раствора гидроокиси калия концентрации 400 г/л. Или прибавляют две капли раствора креатина, три капли спиртового раствора 1-нафтола и две капли раствора гидроокиси калия, перемешивают содержимое пробирки после прибавления каждого реактива. После прибавления каждого реактива пробирку встряхивают. Появление розового или светло-красного окрашивания через 15 мин. указывает на положительную реакцию.
Salmonella не образует индол.
· способность образовывать индол: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают в бульон Хоттингера или в МПБ (РПБ) с L-триптофаном, или в 5 мл триптон/триптофановой среды. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. После инкубирования, к посеву прибавляют по 1 мл реактива Эрлиха и Ковача. Образование красного слоя указывает на положительную реакцию.
Salmonella не сбраживает сахарозу, но сбраживает манит. При сбраживании маннита цвет среды изменяется, образуется или не образуется газ.
· способность сбраживать манит и сахарозу: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают с среды Гисса с маннитом и сахарозой. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч.
Большинство штаммов Salmonella подвижны.
· способность двигаться: культуру со скошенного РПА (ПА) пересевают уколом с помощью бактериальной иглы в полужидкий МПА. Культивирование – (36±1)ºС 24 ч. При росте подвижных культур отмечается диффузный рост по всему столбику агара, при росте неподвижных – вдоль места укола.
Salmonella paratyphi не образует L-лизиндекарбоксилазу, остальные образуют.
· образование L-лизиндекарбоксилазы: инокулируют снизу жидкую L-лизиндекарбоксилазную среду. Культивирование – (37±1)ºС 24±3 ч. Помутнение и пурпурный цвет среды указывает на положительную реакцию. Желтый цвет – на отрицательную.
Salmonella, кроме Salmonella arizonae не обладают β-галактозидазой.
· наличие β-галактозидазы: суспендируют петлей суточную культуру со скошенного РПА (ПА) в 0,25 мл физраствора, прибавляют одну каплю толуола и встряхивают пробирку. Помещают ее на водяную баню при температуре 37ºС и оставляют примерно на 5 мин. Затем добавляют0,25 мл реактива для определения β-галактозидазы и перемешивают. Оставляют пробирку на водяной бане при 37ºС в течение (24±3) ч, наблюдая за изменением цвета через определенные промежутки времени. Желтый цвет указывает на положительную реакцию. Изменение цвета обнаруживается примерно через 20 мин.
Дата добавления: 2017-01-21; просмотров: 3121 | Нарушение авторских прав | Изречения для студентов
Читайте также:
Рекомендуемый контект:
Поиск на сайте:
© 2015-2020 lektsii.org – Контакты – Последнее добавление
Источник
КОЛИБАКТЕРИОЗ
Острая инфекционная болезнь всех видов сельскохозяйственных и мелких домашних животных, птиц и пушных зверей, главным образом молодняка. Широко распространена. Заражение происходит алиментарным, реже аэрогенным путём(у птиц).При размножении возбудителя в кишечнике наблюдается энтеротоксическая и энтеритная формы.Они характеризуются диареей, обезвоживанием, интоксикацией (слабость, потеря аппетита, угнетённое состояние), а у взрослых – маститами, эндометритами. У ослабл. животных, а также у птиц возникает колисептицемия – сепсис, при этом E.coli проникает во все органы и ткани, размножается в крови и вызывает гибель. У поросят некоторые серовары E.coli вызывают «отёчную болезнь» – отёк всего тела, головы, интоксикацию и гибель.При попадании в пищ. продукты вирулентные E.coli могут в них накапливаться,выделяя токсины, и вызывают пищевое отравление (токсикоинфекцию) у людей. Факторы вирулентности–термолабильный экзотоксин и термостабильные эндотоксины,гемолизины. Обладает адгезивными свойствами.
Классификация возбудителя:
сем: Enterobacteriaceae, род: Escherichia
· вид:Escherichia сoli(энтеропатогенные штаммы);серовары 01,02,08, 026, О55,078, О111, О157 и др. Методы диагностики:
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:Материал для исследования:
при жизни – кал; посмертно – труп целиком, отрезок тонкого кишечника, брыжеечные лимфатические узлы, паренхиматозные органы, головной мозг.
Микроскопия:мелкие, короткие толстые, полиморфные (1-2 мкм) палочки с закруглёнными концами, располаг. одиночно, реже попарно, беспорядочно, Гр-; спор не образуют; капсулу не образуют (иногда образуют капсулу сероварианты- возбудители «отёчной болезни поросят»- O8, О9, О101, О119); почти всегда подвижны.
Культуральные свойства: E.coli –факультативные анаэробы;опт. t 37oС;18-20 часов.
на МПБ– интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка;
на МПА – сочные, круглые, с ровными краями, серо-белого цвета колонии;
на кровяном МПА может быть гемолиз.
· на среде Эндо – тёмно-малиновые колонии, часто с металлич. блеском
· на среде Левина – фиолетовые или черные колонии, часто с мет. блеском.
· на среде Плоскирева– скудный рост, розовые колонии.
· на среде висмут–сульфит агар не растёт или мелкие зеленоватые колонии.
· 3-х сахарный агар Олькеницкого полностью меняет цвет с розового на жёлтый.
Биохимические свойства:Е.coli обладают высокой сахаролитической активностью; для её выявления проводят посевы на «цветной ряд» (среды Гисса); сбраживает с образованием кислоты и газа глюкозу, сбраживает лактозу (изредка могут быть лактозоотрицательные штаммы E.coli), маннит и другие сахара. Не разжижают желатин, Н2S не образуют, образуют индол, реакция с метиловым красным +: (среда окрашивается в розово-красный цвет), реакция на ацетоин «-»,(желтое окрашивание среды). На среде Симмонса с цитратом не растёт (среда остаётся зелёной).
Биопроба. П/кожно заражают выделенной микроб. к-рой белых мышей и цыплят (при исследовании пат.материала от птиц). Иногда цыплят – интраорбитально.
СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД:
1. РА (пробирочная и на стекле) для серотипизации полученного антигена (микробной культуры). Антиген для РА должен быть убит прогреванием на водяной бане.
2. РА с антиадгезивными сыворотками;
3. МФА
БИОПРЕПАРАТЫ:
Их создано очень много. Наиболее известны:
Диагностические:
1)групповые и монорецепторные О-коли агглютинирующие сыв.; 2)люминесцентные сыворотки для МФА; 3)адгезивные коли-сыворотки.
Лечебные:
5. Сыворотка поливаливалентная против против колибакт. и Salm с/х животных.
6. Колипротектант ВИЭВ (взвесь убитой к-ры E.coli, отмытой от токсина и консервир. формалином для пассивной иммунизации новорожденного молодняка–per os за 30 минут до первой выпойки молозива
7. Антиадгезивные гипериммунные сыворотки
8. Бактериофаг против против колибактериоза и паратифа. Антибиотики.
Профилактические:
1.В-на «коли-вак»- для получения колострального иммунитета у молодняка вакцинируют стельных коров, супоросных свиноматок, суягных овец.
2.В-на поливалентная против колибактериоза и сальмонеллёза пушных зверей – вакцинируют беременных самок для получения колострального иммунитета.
3.Гидроокисьалюмин(ГОА) формолтиомерсаловая в-на (для КРС, МРС и свиней)
4.Инактивированная формолвакцина против колибактериоза кур – аэрозольно, родительское стадо, за 7-10 сут. до взятия яиц на инкубацию для получения трансовариального иммунитета + цыплятам – с питьём.
Дифференциальная диагностика эшерихий от сальмонелл
Признаки | E. сoli | Salmonella |
Образование Н2S | – | + |
Образование индола | + | – |
Расщепление лактозы | + (изредка -) | – |
Свертывание молока | + | – |
Колонии на ср. Эндо | Вишнёвые с металл.блеском и без него | Светло-розовые |
Колонии на ср. Левина | Фиолетовые или чёрные с металл. блеском или без него | Голубовато-сизые |
Колонии на ср. Плоскирева | Розовые | Серо-желтые |
Висмут-сульфит агар (ВСА) | Не растет(или мелк.зеленоватые кол.) | Черные |
Среда Симмонса с цитратом | Не растёт | Растёт, среда синеет |
Рост на 3-х сахарном агаре | Среда желтеет | Розовый скос, жёлтый столбик, чёрные пятна |
РА | с Salm. Аг (живым) + | с Аг E.coli (инактив) + |
ТУБЕРКУЛЕЗ
Туберкулез – инфекционная, хронически протекающая болезнь человека и животных Патологоанатомически характеризуется образованием туберкул (бугорков) в органах и тканях и творожисто-перерожденных туберкулезных очагов. Болеют практически все виды животных и птиц, в т.ч. пресмыкающиеся. (к.р.с., м.р.с., свиньи, лошади, кошки, собаки, олени, маралы, куры, индейки, цесарки, фазаны, павлины, голуби, утки и др. При аэрогенном заражении первичный инфекц. очаг развивается в легких, а при алиментарном – в мезентериальных лимф. узлах, из первичных фокусов микобактерии могут попасть в кровь, что приводит к генерализации процесса;факторы вирулентности-эндотоксины-туберкулины. Жирные кислоты способствуют распаду тканей. Корд-фактор нарушает дыхание и фосфорилирование клеток. L-формы(без клеточной стенки)обладают способностью к реверсии в типичные микобактерии. Истощение, слабость, кашель (или понос), субфебрильная t, гибель.
Микобактерии туберкулеза обладают значительной устойчивостью к хим.и физ.воздействиям. В высушенной мокроте, кусочках пораженной ткани, пыли микобактерии жизнестойки от 2 до 7 мес и более. В воде – 5 мес, в почве – 7 мес, при гниении материала – 76-167 дней и дольше.
Источник