Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек

Еще до возникновения медицины люди эмпирическим путем пришли к выводу, что в чистоте заключен залог здоровья. От той поры было очень далеко до представления о существовании БГКП, и смывы их брать было некому.

Регулярные умывания, стирка одежды, обработка продуктов питания перед использованием их в приготовлении блюд стали первыми зачатками санитарии. Постепенно количество навыков чистоплотности увеличивалось: чистка зубов, посещение бань или саун, канализование отходов.

Виды микробных загрязнений

Изобретение микроскопа положило начало микробиологии, которая не только выявила наличие микроорганизмов, но и установила их связь с возникновением заболеваний у людей. Появились первые научно обоснованные санитарные правила, рекомендации и законы, охраняющие здоровье граждан.

Изучение инфекционных заболеваний людей и животных привело ученых к выводу о том, что источниками заражения являются они сами. Бактерии, являющиеся причиной болезней, попадают на продукты питания, предметы быта с микрочастицами кала или каплями слюны. Так были определены две большие группы бактериальных загрязнений.

Оральная группа, представленная микроорганизмами, обитающими в полости рта.
Фекальный вид загрязнения бактериями, которые попадают во внешнюю среду из кишечника людей и животных.

Встал вопрос о том, присутствие какого вида бацилл точно свидетельствует об инфекционной опасности объекта или продукта питания. Ведь в кишечнике и ротовой полости сотни различных видов микробов. Была проведена колоссальная работа по выявлению показательных представителей микрофлоры. Определили две группы:

стафилококки как показатель орального обсеменения;
бактерии группы кишечной палочки (БГКП) для определения фекального загрязнения.

Во рту могут находиться разные виды стафилококков. Присутствие любого из стафилококков в большом количестве будет свидетельствовать о загрязнении. Но есть среди них особо показательный стафилококк. Это золотистый стафилококк, получивший свое название по цвету колоний, которые он создает на лабораторных средах.

БГКП в отличие от стафилококков составляют разнородные микроорганизмы: цитробактеры, эшерихии, шигеллы, иерсинии и другие бациллы. Их всех роднит между собой похожесть на главного представителя кишечной флоры. Это кишечная палочка. Хотя их свойства похожи, на лабораторных средах они образуют колонии разного вида и цвета.

Среди представителей БГКП эшерихии отличаются по свойствам размножения от цитробактера и энтеробактера. Практически это используется для определения давности микробного обсеменения. Присутствие эшерихий свидетельствует о недавнем загрязнении. Наличие цитробактера или энтеробактера означает, что с момента появления БГКП на исследуемом месте прошло несколько недель.

На основании данных изучения микроорганизмов разрабатывались правила и рекомендации, которые легли в основу создания регламентирующей документации.

СанПиН – санитарные правила и нормы.
МУ – методические указания.
Приказы.
Санитарные правила.

В них расписаны все действия санитарных служб: периодичность проверок, объекты контроля, рекомендованные методики, использование сред для посева, режимы роста стафилококков или БГКП из смыва. Скрупулезность описания действий в МУ и СанПиН объясняется серьезностью вопроса инфекционной безопасности населения.

Забор материала, его исследование

Для изучения стафилококков или БГКП их нужно собрать с поверхности объекта. Простейшая методика – взятие смыва. Для выполнения смыва необходимы стерилизованные перед использованием материалы и емкости.

Пробирки.
Пептонный раствор.
Ватные тампоны.
Рамка 5х5 см.

Чтобы собрать с поверхности большее количество стафилококков или БГКП, тампон увлажняется раствором. Им тщательно протирается предмет или руки персонала. Смыв с поверхности производится с помощью рамки. По правилам МУ и СанПиН надо взять 4 смыва с разных мест объекта. Затем тампон помещается в пробирку и плотно укупоривается.

Пробирки устанавливаются в гнезда штатива, который ставят в специальный контейнер для транспортировки в лабораторию. Для предотвращения получения искаженных результатов используют контейнер, сохраняющий низкую температуру. Иначе стафилококк или БГКП может размножиться в пептонной среде.

По прибытии в лабораторию пробирки с тампонами устанавливают в гнезда аппарата, рабочая часть которого вибрирует, взбалтывая их содержимое. Так достигается максимальный выход стафилококков или БГКП из тампона в раствор. Затем производится посев смыва на среды для роста колоний.

Для определения в смыве БГКП раньше использовалась среда Кесслера на основе лактозы, где индикатором выступал генцианвиолет. Если произошло расщепление углевода с изменением цвета среды, значит, БГКП присутствуют. Сейчас чаще используют среду Кода.

Она более доступна и эффективна. К тому же среда Кода имеет преимущество в цене перед предшественницей – она дешевле. В составе старого материала используется желчь, которая часто дает искажения результатов исследования. Среда Кода в своем составе не имеет подобных включений.

Экспертиза пищевых продуктов, смывов на предмет присутствия БГКП средой Кода модифицированного вида высоко достоверна. Поэтому среда Кесслера быстро замещается более эффективным аналогом Кода.

Новые лаборатории, центры стандартизации и сертификации, надзорные организации используют только среду Кода (индикаторную с тестом на углекислое газообразование). Она рекомендована к применению в МУ и СанПиН, регламентирующих работу экспертных лабораторий.

Контроль загрязнения БГКП в разных учреждениях

Проверки санитарными службами проводятся во всех местах, которые могут явиться источниками массового заражения людей.

Водозаборные станции.
Салоны бытовых услуг.
Бассейны, бани, сауны, аквапарки.
Столовые, рестораны, кафе, другие места общественного питания.
Объекты пищевой промышленности.
ЛПУ (лечебно-профилактические учреждения).
ДОУ (дошкольные образовательные учреждения).

Это основные места, где существует риск инфекционных заболеваний или вспышек массовых пищевых отравлений. Поэтому в отношении этих объектов, особенно ЛПУ и ДОУ, санитарными службами ведется самый строгий надзор. Нарушение СанПиН или МУ работниками этих учреждений влечет за собой наложение суровых санкций, так как цена ошибки – здоровье людей и детей.

Согласно положениям СанПиН или МУ, утверждаются графики выхода специалистов в подконтрольные учреждения для взятия смывов на присутствие стафилококков и БГКП. СанПиН и МУ определяют периодичность плановых проверок и случаи экстренных обследований.

Главное правило плановых мероприятий на соблюдение требований СанПиН и МУ – внезапность приезда специалистов, чтобы застать и оценить истинное положение с бактериальной загрязненностью объекта.

План проверок составляется с учетом количества объектов на территории, возможностей лаборатории. Но не реже, чем установлено в СанПиН и МУ. Периодичность для разных учреждений установлена своя.

ЛПУ контролируется дважды в год органами санэпиднадзора. Его собственная лаборатория проверяет стерилизацию инструментов, рук хирургического персонала еженедельно.
Для клиник родовспоможения специалистами надзорной организации установлена ежеквартальная периодичность.
Сотрудники ЛПУ регулярно проходят обследование на носительство золотистого стафилококка.
Периодичность контроля ДОУ – ежеквартальные проверки.

При проверке этих организаций берутся смывы со всех поверхностей кабинетов, залов, комнат, рук персонала согласно правилам МУ и СанПиН. В случае выявления инфекции накладывается карантин до устранения угрозы заражения. Учреждение или его отделение начинает работу после заключительной дезинфекции.

Все проверки проводятся на основании договора надзорной организации с подконтрольным учреждением по статье КОСГУ (классификации операций сектора государственного управления). По соответствующей статье КОСГУ будут оплачены услуги контролирующей организации.

Образование высшее филологическое. В копирайтинге с 2012 г., также занимаюсь редактированием/размещением статей. Увлечения — психология и кулинария.

Источник

5.1. Объем исследования

5.2.1. Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек

5.2.2. Методика посева на общую бактериальную обсемененность

5.2.3. Методика посева на St.aureus

5.2.4. Оценка результатов

Объем исследования

При текущем санитарном надзоре за предприятиями общественного питания и торговли, детскими и лечебными учреждениями исследование смывов проводят на присутствие бактерий группы кишечных палочек.

Исследование на наличие St.aureus, бактерий рода Рroteus, определение общей бактериальной обсемененности производится по показаниям. Например:

а) Исследование смывов на стафилококки проводят при обследовании кремово-кондитерских цехов, столовых и ресторанов, молочных кухонь и других пищеблоков, обращая особое внимание на контроль рук персонала;

б) общую микробную обсемененность можно определять для установления эффективности санитарной обработки посуды в посудомоечных машинах, а также при оценке новых моющих и дезинфицирующих средств.

В случае повторного обнаружения бактерий группы кишечных палочек в значительном проценте смывов на объекте рекомендуется провести исследование смывов с инвентаря, оборудования и рук персонала на наличие энтеробактерий*(11).

Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек

При плановых санитарно-гигиенических обследованиях для выявления БГКП производят посевы смывов на среды Кесслер с лактозой или КОДА, при этом в пробирку со средой опускают тампон и переносят оставшуюся смывную жидкость.

Посевы на средах Кесслер или КОДА инкубируют при 37°С, через 18 – 24 часа со среды Кесслер производят высев на плотную дифференциальную среду Эндо, со среды КОДА высев производят только в случае изменения окраски среды или ее помутнения. Дальнейший ход исследования см. в п.4.4.1.

Методика посева на общую бактериальную обсемененность

Для определения общей обсемененности поверхностей контролируемых предметов взятие смывов производят по методике, описанной выше (п.4.3.), перед посевом в пробирку с тампоном добавляют 5 мл 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Чашки помещают в термостат при 30°С. Предварительный подсчет выросших колоний производят через 48 часов, окончательный – через 72 часа. Количество колоний, выросших на чашке, умножают на 10 для определения общего количества бактерий, содержащихся на поверхности исследуемого предмета.

Методика посева на St.aureus

Для выявления St.aureus посев смывов производят на чашки с МСА или ЖСА, непосредственно втирая посевной материал тампоном, затем последний погружают в пробирку с 6,5% солевым бульоном. Если необходимо определить и бактерии группы кишечных палочек, то остатки смывной жидкости переносят пипеткой в среды Кесслер или КОДА (п.4.4.1.).

Оценка результатов

Обнаружение санитарно-показательных и условно-патогенных бактерий в смывах с поверхностей чистых, подготовленных к работе предметов, инвентаря и оборудования, а также рук персонала свидетельствует о нарушении санитарного режима и дает основание для проведения административных мер.

Рецепты питательных сред

6.1. Изотонический раствор – 0,85% раствор хлористого натрия

6.2. 0,1%-й водный раствор пептона (пептонная вода)

6.3. Среда для определения общего количества мезофильных аэробных и

факультативно анаэробных микроорганизмов

6.4. Среда Кесслер с лактозой

6.5. Среда КОДА

6.6. Бульон с лактозой, бычьей желчью и бриллиантовым зеленым – ЖЛБ

6.7. ЕС-бульон (для подтверждающего посева на Е.coli по методу

НВЧ)

6.8. Среда Гисса с глюкозой

6.9. Среды Эндо, Левина

6.10. Среда для определения индолообразования

6.11. Бульон на переваре Хоттингера для определения индолообразования

6.12. Среда Кларка

6.13. Раствор метилового красного для теста с метил-рот

6.14. Реактивы для реакции Фогеса-Проскауэра

6.15. Цитратная среда Козера

6.16. Среда Симмонса

6.17. Среда Ресселя с мочевиной из сухих питательных сред

6.18. Тресахарный агар с мочевиной по Олькеницкому

6.19. Солевой бульон

6.20. Сахарный бульон

6.21. Стерильное молоко

6.22. Молочно-солевой агар

6.23. Желточно-солевой агар

6.24. Молочный агар

6.25. Цитратная плазма кролика

6.26. Среда для определения реакции окисления маннита в анаэробных

условиях

6.27. Среда Плоскирева из сухих питательных сред

6.28. Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера)

6.29. Среда для определения ферментации мальтозы

6.1. Изотонический раствор – 0,85% раствор хлористого натрия

Для приготовления изотонического раствора с рН 6,9 – 7,0 используют дистиллированную воду, рН которой проверяют индикатором бромтимолблау, при его добавлении цвет воды должен быть бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют. Изотонический раствор разливают в пробирки или флаконы в необходимых количествах, стерилизуют при 1 атм. 20 мин.

Дата добавления: 2016-10-06; просмотров: 4637 | Нарушение авторских прав | Изречения для студентов

Санитарно микробиологическое исследование молока и молочных продуктов

Для оценки санитарно-гигиенического состояния предприятий общественного питания, предприятий пищевой промышленности, лечебно-профилактических и детских учреждений проводят исследование смывов с рук персонала и предметов окружающей обстановки.

В зависимости от цели исследования определяют:

1. Наличие БГКП.

2. Наличие S. aureus.

3. Общее количество бактерий.

Исследования на патогенную микрофлору проводят только по эпидпоказаниям.

На предприятиях общественного питания и в детских учреждениях исследования обычно ограничивают выявлением БГКП (как показатель фекального загрязнения) и S. aureus.

В отделениях хирургического профиля (операционных, отделениях реанимации, интенсивной терапии и т. д.), кроме вышеуказанных показателей, определяют количественную обсемененность микроорганизмами, наличие синегнойной палочки и протея.

Отбор проб. Взятие проб осуществляют методом смывов. Используют ватные тампоны (палочка с намотанной на нее ватой вставлена в пробирку) или салфетки 5×5 см, которые захватывают стерильным пинцетом. Тампоны и салфетки увлажняют, помещая их в пробирки с 2 мл изотонического раствора натрия хлорида.

Примечание. Марлевые салфетки, предварительно завернутые по одной в бумажные пакетики, и ватные тампоны, помещенные в пробирки, стерилизуют в стерилизационном шкафу 1 ч при 160° С.

Смывы с рук делают в следующей последовательности: начинают с левой руки, с участков меньшей загрязненности — протирают тыльную сторону руки от кисти к пальцам, затем ладонную сторону, между пальцами и под ногтевым ложем. Этим же тампоном в такой же последовательности производят смывы с правой руки.

Смывы с предметов обихода при контроле больших поверхностей делают из нескольких мест. Исследуемые участки ограничивают рамкой трафарета площадью 50×50 или 100×100 см2. Трафарет изготовляют из проволоки и перед употреблением прожигают над пламенем горелки.

Примечание. Смывы, как правило, берут с чистых, подготовленных к работе предметов, а с бывших в употреблении — только по эпидпоказаниям.

Исследование на БГКП

Первый день исследования

Взятые смывы засевают на среду Кода. При росте кишечной палочки среда изменяет цвет. При изменении цвета среды исследуемый материал пересевают на среду Эндо.

Второй день исследования

Изучают колонии на среде Эндо. Из подозрительных колоний делают мазки и микроскопируют. Дальше исследование ведут по обычной схеме.

Выявление S. aureus

Полученные смывы засевают на желточно-солевой агар в чашке Петри и параллельно на 6,5% солевой бульон (среда накопления). На желточно-солевой агар можно сделать посев тампоном. Бульон предварительно разливают в пробирки по 5 мл и в каждую засевают 0,2-0,3 мл смыва. Посевы инкубируют при 37° С в течение 24 ч. Дальше исследование ведут по общепринятой методике.

Определение общего числа бактерий

Первый день исследования

К 2 мл взятых смывов прибавляют 8 мл изотонического раствора натрия хлорида. Получается разведение 1:5. Тампоны тщательно отмывают встряхиванием.

1 мл засевают в чашку Петри и заливают 12 мл расплавленного и остуженного до 45° С агара. Чашки инкубируют в термостате при 37° С 24 ч.

Второй день исследования

Посевы вынимают из термостата, подсчитывают количество выросших колоний и делают пересчет на 1 см2 исследуемой поверхности.

Выявление синегнойной палочки (см. главу 24).

Выявление протея (см. главу 32).

Внимание! Выявление в смывах патогенной флоры производят только по эпидпоказаниям.

Контрольные вопросы

1. С какой целью проводят исследование смывов с рук и предметов обихода?

2. Какие основные исследования проводят?

3. Как определяют общее количество бактерий?

4. На какую среду засевают смывы для:

а) выделения БГКП?

б) выделения S. aureus?

Задания

1. Приготовьте тампоны.

2. Сделайте смывы с рук друг у друга и посейте на среду Эндо (смывы произвести до мытья рук и после мытья).

3. На второй день учтите результаты посевов.

Дата добавления: 2016-11-22; просмотров: 503 | Нарушение авторских прав

Похожая информация:

Поиск на сайте:

Бактерии группы кишечной палочки

Бактерии группы кишечной палочки

БГКП (бактерии группы кишечной палочки) — это довольно широкая группа микроорганизмов, куда входят представители родов: эшерихия, цитробактер, энтеробактер, клебсиелла, серация. Представители широко распространены в природе.

БГКП относятся к санитарно-показательной микрофлоре и по её наличию косвенно можно судить о безопасности продукта.

Основная среда обитания кишечной палочки — кишечник человека, животных, птиц. Из кишечника постоянно выделяется во внешнюю среду, далее распространение идет в воду, почву, оборудование и т.д. Степень размножения высокая. Является одним из основных видов порчи продуктов и приводит к порокам (посторонний горький вкус, брожение).

Эшерихиозы (коли-инфекция, коли-энтерит, диарея путешественников). Возбудителями являются диареегенные штаммы кишечной палочки Е. coli, которая кроме инфекции может вызывать токсикоинфекции. Заболевание характеризуется общей интоксикацией организма и дисфункцией кишечника.

Патогенные Е. coli устойчивы во внешней среде: в молоке сохраняют жизнеспособность до 34 дней, в детских питательных смесях — до 92 дней, на игрушках и предметах обихода — до 3…

5 мес. Основным источником возбудителя является больной человек. Механизм передачи возбудителя — фекально-оральный, через пищевые продукты, воду, загрязненные руки, игрушки и т.п. Естественная восприимчивость людей к этому возбудителю очень высока, особенно среди новорожденных и ослабленных детей. Основными эпидемиологическими признаками заболевания являются диарея, тошнота, рвота, кишечные спазмы, небольшая лихорадка.

Клебсиеллы известны как возбудители заболеваний дыхательных путей (пневмонии, риносклеромы), а также заболеваний урогенитального тракта, мозговых оболочек, глаз, суставов и позвоночника.

Кроме того, клебсиеллы описаны как возбудители различных заболеваний животных: мастита, пневмонии, септицемии. Они широко распространены в природе: почве, воде, цветах, зернах, семенах, овощах. Выделяются из морской и питьевой воды, молочных продуктов. Патогенность клебсиелл была известна с момента их описания. Немецкий исследователь Е. Клебс обнаружил возбудителя в бронхиальном секрете лёгких, почках и жидкостях мозговых желудочков людей, умерших от крупозного воспаления лёгких, осложненного менингитом.
Добавить документ в свой блог или на сайт