Оксидазный тест кишечная палочка

    Определение оксидазной активности бактерий на мембранном фильтре. Оксидазный тест выполняют путем наложения мембранного фильтра стороной с выросшими колониями вверх на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченной реактивом для определения оксидазной активности. Через 2—  [c.131]

    Окраска по Граму и постановка оксидазного теста [c.389]

    Постановка оксидазного теста при работе методом мембранных фильтров [c.390]

    Если при высеве из флаконов и пробирок, где отмечены помутнение, кислота и газ, на секторах среды Эндо выросли темнокрасные с металлическим блеском и без него (лактозоположительные) колонии, то их принадлежность к бактериям группы кишечных палочек подтверждают микроскопированием и постановкой оксидазного теста по п. 3.3.15.1. [c.198]

    Окраска по Граму и постановка оксидазного теста. . , , . 389 [c.1186]

    Учет результатов исследования. Для учета выбирают фильтры, на которых выросли изолированные колонии, и определяют их оксидазную активность. Все колонии, которые приобрели сине-фиолетовую окраску, из учета исключают. Среди колоний, не изменивших первоначального цвета, подсчитывают число темно-красных с металлическим блеском и без блеска, а также слизистых, крупных, выпуклых лактозоположительных колоний с отпечатком на обратной стороне фильтра. Дальнейшего подтверждения принадлежности таких колоний с характерной морфологией, окраской и отрицательным оксидазным тестом к лактозоположительным кишечным палочкам не требуется. [c.134]

    Постановка оксидазного теста при работе бродильным методом [c.390]

    При наличии в мазках грамотрицательных, коротких, полиморфных, не образующих спор палочек (возможны удлиненные нитевидные формы, а также крупные палочки, полярно окрашенные) выполняют оксидазный тест (п. 3.3.15.1). [c.195]

    Реактивы для оксидазного теста (фильтровальная бумага и реактивы для оксидазного теста могуг быть заменены готовой бумажной индикаторной системой на оксидазу). [c.239]

    Примечание. Если оксидазный тест со среды Эндо проявляется недостаточно четко из-за того, что мешают ингибиторы (это относится в основном к темнокрасным колониям), то для получения правильного результата такие колонии можно пересеять на сектора или на скошенный питательный агар и после подращивания повторить оксидазный тест. [c.190]

    Применение оксидазного теста на глюкозу и галактозу [c.298]

    На поверхность хорошо подсушенного питательного агара с помощью микропипетки по каплям вносят 0,01 или 0,02 см испытуемой воды или ее разведений. Чашки переворачивают только после полного высыхания капли. После инкубации посевов при 37 °С 24 ч подсчитывают количество колоний с помощью лупы. Подсчет облегчается проявлением оксидазной реакции после введения по каплям (на место посева) реактива для определения оксидазного теста. [c.248]

    При росте на фильтрах характерных для кишечных палочек колоний выполняют оксидазный тест, как это описано в п. 4.1.2.3, и подсчитывают колонии, не изменившие первоначального цвета темнокрасные с металлическим блеском и без него, а также слизистые крупные выпуклые розовые с красным центром, с отпечатком на обратной стороне фильтра. [c.248]

    Для постановки оксидазного теста мембранные фильтры с выросшими на них колониями переносят (не переворачивая) на лист фильтровальной бумаги, предварительно смоченный реактивом для выявления оксидазы (рец. 32). Результат реакции учитывают через 2—4 мин. [c.309]

    Изучают и отбирают подозрительные культуры на полиуглеводных средах (дающие характерные изменения сред), микроскопируют окрашенные по Граму мазки из культур, ставят оксидазный тест и РА с холерными сыворотками (01, R0, Огава, Инаба [c.168]

    Для целей санитарно-бактериологического анализа оксидазную реакцию использовали микробиологи ЧССР и ГДР и предложили ее в качестве основного дифференциального теста при определении коли-индекса в Унифицированных методах СЭВ (1966, 1975). Оксидазный тест в нашей стране был широко проверен в практике сани-тарнО -бактериологического анализа воды различных подо,емов (Т. 3. Артемова, 1971, 1972 Г. И. Овсянникова, 1974 И. Ф. Сухачева, 1974), питьевой воды на различных водопроводных станциях (Л. Е. Корш и др., 1974 Т. 3, Артемова, Л. Е. Корш и др., 1974) и включен в ГОСТ 18963-73. [c.27]

    При росте иа фильтрах колоний, характерных для БГКП (темно-красные с металлическим блеском и без блеска, красные, розовые, с темным центром, бесцветные), выполняют оксидазный тест. Наличие активной оксидазы у всех колоний позволяет дать отрицательный ответ также через 18—24 ч. [c.130]

    Однако при выполнении оксидазного теста необходимо приготовление растворов реактивов перед определением. Горьковским научно-исследовательским институтом эпидемиологии и микробиологии разработана стандартная бумалиндикаторная система па оксидазу, которая представляет из себя фильтровальную бумажку, пропитанную соответствующими реактивами. В сухом виде бумажная система может сохраняться в темном месте длительное время. Для приготовления системы к ра- [c.155]

    Посев прямой или с помощью мембранных фильтров, а таюке посев из сред накопления делают на двууглеводную среду Эндо. После инкубации 16—18 ч при 37°С выполняют оксидазный тест и в качестве БГКП учитывают все темно-красные и красные колонии с металлическим блеском и без блеска, не обладающие оксидазной активностью. [c.133]

    Ускоренный одноэтапный метод определения лактозоположительных кишечных палочек. После широкой проверки рекомендован к использованию ускоренный одноэтапный метод определения лактозоположительных кищечных палочек, который сокращает продолжительность исследования на 6—24 ч, а по сравнению с Меледународ-ными стандартами (1973) —на 48 ч. Помимо сокращения времени анализа, метод существенно его упрощает (под-тверлсдающая бродильная проба на лактозе заменена экспрессным оксидазным тестом). Введение оксидазного [c.133]

    По 2—3 изолированные колонии каждого типа, выросшие на секторах среды Эндо, снимают петлей или стеклянной палочкой и наносят штрихом на фильтровальную бумагу, смоченную реактивом. В месте нанесения бактериальной массы бумага не изменяет цвета, если оксидазный тест отрацательный, и синеет в течение 1 мин, если бактерии имеют активную оксидазу. Исследование изолированных колоний является обязательным, иначе можно необоснованно отбросить кишеч- [c.189]

    После подсчета лактозоположительных колоний, как это описано выше, обращают внимание на остальные — розовые с темным центром, бесцветные, которые не изменили цвета после постановки оксидазного теста. Подсчитывают число колоний разного типа и по 2—3 колонии каждого типа пересевают на полужидкую среду с глюкозой для подтверждения их принадлежности к БГКП. Образование кислоты и газа при 37°С в течение 24 ч расценивают как положительный результат. Микроскопия не обязательна. [c.135]

    Выполнение оксидазного теста весьма важно в экспедиционных условиях, так как позволяет быстро, без дополнительного выращивания бактерий, проводить дифференцирование БГКП от грамотрицательных водных сапрофитов. На сочетании оксидазного теста с дифференциальными средами основаны простые ускоренные одноэтапные методы определения БГКП на мембранных фильтрах, дающие ответ в первичном посеве через 12— 18 ч без подтверждающих бродильных проб. Такие методы рекомендованы к использовапию в полевых исследованиях воды. [c.155]

    Оксидазный тест предназначается для дифференциации бактерий семейства Еп1егоЬас1епасеае от грамотрицательных бактерий семейства Рзеиёотопаёасеае и других водных сапрофитных бактерий, которые обладают активным ферментом оксидазой и окисляют фени-лендиаминовые соединения до индофенола ярко-синего цвета. [c.189]

    Наличие грамотрицательных палочек в мазках и отрицательный оксидазный тест позволяют немедленно дать положительный ответ о наличии бактерий группы кишечных палочек в анализируемом объеме воды. Анализ воды по этапам очистки заканчивают учетом результатов по наличию или отсутствию на подтверждающей среде Эндо темнокрасных колоний грамотрицательных палочек, не обладающих оксидазной активностью. [c.198]

    К бактериям группы кишечных палочек относят грамотрицатель-ные, не образующие спор палочки, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при (37 2) °С в течение 5—24 ч и с отрицательным оксидазным тестом. [c.244]

    При росте на фильтрах колоний, характерных для кишечных палочек (темно-красных с металлическим блеском и без него, красных, розовых слизистых, розовых с темным центром, бесцветных) выполняют оксидазный тест. Мембранный фильтр колониями вверх переносят на кружок фильтровальной бумаги, смоченной реактивом для определения оксидазной активности. Учитывая бактерицидность реактивов для определения оксидазной активности, мембранный фильтр сразу после проявления реакции следует перенести обратно на среду Эндо и не позднее 5—7 мин пересеять оксидазоотрицательные колонии в полужидкую среду с глюкозой (если это необходимо по дальнейшему ходу анализа). [c.245]

    Оксидазный тест на глюкозу и галактозу позволяет определять содержание этих веществ в ростовых средах, в нейтрализованных гидролизатах полисахаридов и в ферментных реакционных смесях, например содержа-ние глюкозы при ферментативном гидролизе целлюлозы, ИТ. п. Глюкозооксидаза окисляет только р-О-глюкозу, нО в присутствии мутаротазы (входящей в некоторые имеющиеся в продаже препараты) она позволяет определять и а-В-глюкозу. Для проверки возможного влияния солей и других ингибиторов в каждый неизвестный раствор целесообразно добавлять стандарт без углеводов. [c.298]

    Колонии, по результатам оксидазного теста относящиеся к роду нейссерий, в течение ближайших 2 мин (во избежание гибели бактерий под влиянием реактива) пересевают а сектор чашки с сывороточным агарои. [c.196]

    Оксидазный тест предложен для дифференциации бактерий семейства Enteroba teria eae от грамотрицательных бактерий семейства Pseudomonada eae и других водных сапрофитов, которые в отличие от кишечных бактерий вырабатывают фермент оксидазу, окисляющую фенилен-диаминовые соединения до индофенола, имеющего ярко-синий цвет. [c.309]

Методы общей бактериологии Т.3 (1984) — [

c.37

]

Источник

Тесты для идентификации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов

Стафилококки Морфологически Staphylococcus- грамположительные кокки, располагающиеся в виде характерных «виноградных гроздей». Патогенные стафилококки на кровяном агаре образуют колонии диаметром 2—3 мм, окруженные прозрачной зоной гемолиза; на молочно- или желточно-солевом агаре — колонии, окруженные зоной просветления (протеолитическая активность) и радужным венчиком (наличие фермента- лецитовителлазы).

Из подозрительных колоний делают высев на скошенный мясопептонный агар для выделения чистой культуры. После 24 ч инкубации при температуре 37°С проверяется плазмо коагулирующая активность культуры посевом в пробирки с 0,5 мл цитратной плазмы (человеческой или кроличьей) в разведении 1:4. Патогенные стафилококки коагулируют плазму в течение 2—24 ч в условиях термостата. Учет производят через 1, 2, 4 и затем 24 ч по образованию небольшого желеобразного сгустка на дне пробирки. Выделенные стафилококки подвергаются фаготипированию при необходимости установления источника возникновения стафилококковой инфекции и путей распространения.

Стрептококки Один из представителей — Str.viridans (зеленящий стрептококк) — постоянный непатогенный обитатель зева. На кровяном агаре Streptococcus образуют мелкие (точечные) сероватые колонии с прозрачной зоной гемолиза (Р~ гемолитические) и колонии с зеленовато-бурым ореолом и повышенной прозрачностью среды (а-зеленящие). На кровяном агаре нередко рост стрептококков подавляется быстрорастущей другой микрофлорой воздуха. Поэтому учет лучше вести на чашках с элективными средами — Гарро и Туржецкого, в которые для подавления сопутствующей флоры добавляется генциан фиолетовый, обладающий бактериостатическими свойствами в отношении сапрофитов воздуха. Культивирование проводят при 37°С. После подсчета выросших колоний из подозрительных на стрептококки делают мазки (стрептококки располагаются короткими цепочками или скоплениями) и затем пересевают на кровяной агар или в сахарный бульон. В бульоне стрептококки образуют цепочки, в чем необходимо убедиться с помощью микроскопии мазков, приготовленных из характерного придонного осадка (в виде хлопьев или крошек на дне пробирки при прозрачном бульоне).

Опытным путем установлена следующая зависимость: если в 2-х чашках после экспозиции в 20 мин развилось 2 колонии, то воздух считают чистым, если 3-4- слабо загрязненным. В классах после занятий исследователями улавливалось до 50000 клеток зеленящего стрептококка в 1м3.

Escherichia coli Колонии со среды Эндо пересевают в лактозный бульон с борной кислотой или в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым, предварительно нагретые до температуры 43-44°С (в водяной бане), и сразу после засева теплые пробирки помещают в термостат при температуре 43 °С на 24 ч. Борная кислота и бриллиантовый зеленый, добавляемые в среды, являются ингибиторами сопутствующей флоры. Появление газообразования свидетельствует о присутствии Е. coli в исследуемой воде. Если нет возможности сделать посев в лактозный бульон с борной кислотой, то идентификацию Е. coli проводят по двум признакам: ферментация лактозы при температуре 44,5°С в течение 24 ч и способности образовывать индол. В этом случае подозрительные на Е. coli колонии засевают параллельно в 2 пробирки: одну с полужидкой средой с лактозой, вторую — со средой для определения индола (бульон Хоттингера, пептонная вода или другая среда, содержащая триптофан), под пробку пробирки вставляют индикаторную бумажку на индол и инкубируют при температуре 44,5°С. Посевом в пробирки со средой ФКП-1 идентификация упрощается, так как в этой среде содержатся лактоза и триптофан. Положительный ответ дается при образовании газа (разложение лактозы) и индола (ферментация триптофана).

Тест Грегерсена Этим тестом можно заменить окраску по Граму. В капле 3%-ного водного раствора КОН на предметном стекле эмульгируют бактерийную массу, взятую с плотной среды. Спустя несколько секунд после перемешивания за петлей тянутся слизистые нити, что указывает на принадлежность исследуемой колонии к грамотрицательному виду. Грам(+) бактерии слизистые нити не образуют.

Каталазный тест Наносят 1-2 капли 3% перекиси водорода непосредственно на исследуемую колонию. Появление пузырьков свидетельствует о выделении бактериями каталазы.

Оксидазный тест Тест проводят с колониями микроорганизмов, выросшими на среде Эндо. Часть подозрительных колоний стерильной петлей переносят на фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом: диметил-п-енилендиамином и а-нафтолом. Если микроорганизмы, выросшие на фильтре, выделяют оксидазу, цвет колонии через 2—5 мин изменяется на сине-фиолетовый. Такие колонии не учитывают при анализе воды. Можно на фильтровальную бумагу с индикатором накладывать весь фильтр с выросшими на нем колониями. Колонии БГКП темно- красного цвета не изменяют своей окраски (так как кишечные палочки оксидазоотрицательны) и учитываются как представители фекального загрязнения воды.

В сомнительных случаях — при наличии колоний розовых или бесцветных (лактозоотрицательных), не обладающих оксидазной активностью, дополнительно определяют способность бактерий ферментировать глюкозу при температуре 37° С и проявлять протеолитическую активность на среде Эндо с молоком. Колонии учитывают как БГКП, если они образованы грамоотрицательными палочками, ферментирующими глюкозу до кислоты и газа и не обладающими протеолитической активностью.

Список рекомендуемой литературы

1.    Мудрецова-Висс К.А., Кудряшова А.А., Дедюхина В.П. Микробиология, санитария и гигиена: учеб. для вузов. -7-е изд. — М.: ИД «Деловая литература», 2001. — 388 с.

2.    Санитарная микробиология / Н.В. Билетова, Р.П. Корнелаева, Л.Г. Кострикина и др. Под ред. С.Я. Любашенко. — М.:Пищ.пр-сть, 1980.-352 с.

3.    Мармузова Л.В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности. — М.: ИРПО, Академия, 2000. — 132 с.

4.    Фомин Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам: энциклопедический справочник. — 3-е изд., перераб. и доп. — М.: Изд-во «Протектор», 2000. — 848 с.

5.    Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под ред. А.А.Воробьева, Ю.С.Кривошеина. — М.: Мастерство, Высш.шк., 2001.-224 с.

6.    Санитарная микробиология и вирусология / З.Н. Кочемасова, С.А. Ефремова, A.M. Рыбакова — М.: Медицина, 1987. — 352 с.

7.    Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды: методические указания. — М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2001. — 42 с.

8.    Определитель бактерий Берджи. В 2-х т.: Пер.с англ. / Под ред. Дж. Хоулта и др. — М.: Мир, 1997.

9.    Методы общей бактериологии: В 3-х т.- Пер. с англ. / Под ред. Ф. Герхардта и др. — М.: Мир, 1983.

Источник

2.1. Оксидазный тест.

2.2. Индольный тест.

2.3.Ферментация
углеводов (“пестрый ряд”).

2.4.ONPG-тест.

2.5.Утилизация
цитрата.

2.6.Утилизация
малоната.

2.7.Тест с трибутирином (для
идентификации M.catarrhalis).

2.8.Тесты
декарбоксилирования и гидролиза аминокислот.

2.9.Фенилаланиновый
тест.

2.10.Сероводородный
тест (H2S-тест).

2.11.Гидролиз эскулина.

2.12.Уреазный
тест.

2.13.Разжижение
желатина.

2.14.Тест с
метиловым красным.

2.15.Тест
Фогес-Проскауэра.

2.16.Редукция
нитратов.

2.17.Окислительно-ферментативный
(ОФ) тест.

Далее

2.1.       
Оксидазный тест.

Принцип. Определенные виды бактерий вырабатывают либо
цитохромоксидазу, либо индофенолоксидазу (железосодержащий гемопротеин),
которые катализируют перенос электронов от донаторов водорода (НАДН) к
акцепторам (обычно кислороду). В оксидазном тесте бесцветный краситель p-фенилендиамин
дигидрохлорид, используемый как искусственный акцептор электронов, при участии
оксидазы окисляется и образует окрашенное вещество индофенол синий. Тест
используют для первичной характеристики грам(-) бактерий. Особую помощь он
оказывает при идентификации бактерий родов Aeromonas, Plesiomonas, Pseudomonas, Campylobacter, Pasteurella, Neisseria.

Реагенты.
Можно использовать готовые реагенты или готовить  их в лаборатории. Для приготовления 1%
раствора тетраметил-p-фенилендиамин дигидрохлорида добавляют 5 мл
дистиллированной воды к 50 мг порошка реагента 
(заготовленные впрок навески реагента хранят в укупоренных пластиковых
или стеклянных пробирках) и тщательно перемешивают. Реактив готовят
ежедневно. Неиспользованный остаток реактива сбрасывают.

 Коммерческие
тесты представляют собой 
импрегнированные реагентом полоски или диски фильтровальной бумаги.

 Контроль
качества проводят в день постановки
теста с культурами P. aeruginosaАТСС 27853 (положительный контроль) и E. coliАТСС 25922 (отрицательный контроль). 

Ход
исследования.

Прямой способ
на чашках:
Наносят 1 каплю реагента
непосредственно на изучаемую колонию и наблюдают появление темно-фиолетового
окрашивания.

Непрямой
способ на фильтровальной бумаге.

Þ         
Помещают полоску
(диск) фильтровальной бумаги в пустую чашку Петри и капают 1-2 капли реактива,
либо используют готовые полоски, импрегнированные реагентом, и смачивают их
деионизированной водой.

Þ         
Стерильным
аппликатором или посевной петлей берут исследуемую колонию и размазывают ее по
полоске или диску.

Þ         
При положительной
реакции через 10-30 сек. Появляется окрашивание интенсивно синего или
фиолетового цвета. При отрицательной реакции цвет не изменяется. При
неопределенном результате, когда окрашивание появляется позже 30 сек.,
исследование необходимо повторить со свежей культурой (18-24-часовой). Как
правило, грам (-) бактерии  с замедленной
оксидазной реакцией не принадлежат к семейству Enterobacteriaceae, так как они не продуцируют фермент цитохромоксидазу.

Ограничения
и предосторожности.

1)          
Нельзя использовать для посева культуры петли или
проволоку из нержавеющей стали или нихрома,
так как может наблюдаться ложно положительная реакция за счет
образования продуктов окисления при обжиге петли в пламени для стерилизации.

2)          
Изучение
бактерий, выросших на агаре МакКонки, Левина или других дифференциальных
средах, не подходит для этого теста, так как индикаторы с этих сред могут дать
ложно отрицательную реакцию.

3)          
Ложно
отрицательная реакция может наблюдаться в смешанных культурах, относящихся к
родам  Pseudomonas и Neisseria,
так как те виды  Pseudomonas,
которые вырабатывают оксидазу, также продуцируют некую ингибирующую субстанцию,
влияющую на выработку оксидазы  Neisseria spp.

4)          
Импрегнированную
реагентом бумажную полоску после смачивания используют только 1 раз.

5)          
Результаты
следует учитывать не более 30 сек.

6)          
Во избежание
ошибок при выборе схемы идентификации оксидазный тест следует применять для
всех грам (-) бактерий.

Далее

Источник

Читайте также:  Антибиотики при кишечной палочке во влагалище