Получение ферментов из кишечной палочки
| Вид микроба | Лактоза | Глюкоза | Маннит | Мальтоза | Сахароза | МПБ | |
| Индол | Сероводород | ||||||
| E. coli | КГ | КГ | КГ | КГ | – | + | – |
Примечание: К Г – ферментация углевода сообразованием кислоты и газа, (–) – отсутствие ферментации или образования
Ферментативная активность изучена на пестром ряду. Кроме питательной основы и углевода к среде добавлен индикатор бромкрезолпурпур. Исходный цвет среды фиолетовый, при образовании кислоты цвет среды становится желтым. Газообразование улавливают с помощью поплавков – коротких стеклянных трубочек, запаянных с одного конца, помещенных в питательную среду, открытым концом вниз. Образование индола определено с помощью реактива Ковача: при положительной реакции конец бумажки окрашивается в малиново-розовыйцвет.
4. Знакомство со схемой лабораторного диагноза эшерихиоза по схеме(зарисовать табл.3)
Среди кишечных палочек встречаются представители, которые способны вызывать заболевания кишечника, варьирирующие от умеренной диареи до тяжелого холероподобного заболевания. В основном заболевания возникают у детей 1 года жизни, но могут возникать также у детей старшего возраста и взрослых.
Кишечные палочки, вызывающие поражения кишечника, разделяют на три группы:
1. Энтеропатогенные кишечныепалочки (ЭПКП)– поражают детей первого года жизни, особенно часто в коллективах (серогруппы 026,055, 0111 и др.)
2. Энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП)– поражают детей старше года и взрослых людей (серогруппы 01,05,06 и др.). Эта группа кишечных палочек характеризуется способностью продуцировать энтеротоксин, который реагирует с аденилциклазной системой клеток эпителия слизистой тонкого кишечника, нарушает их функции вызывает холероподобные заболевания.
3. Энтероинвазионные кишечные палочки (ЭИКП)– поражают детей старше года и взрослых людей (серогруппы 025,0124 и др.) Эта группа кишечных палочек обладает способностью к инвазии в клетки слизистой оболочки толстой кишки и вызывает дизентериеподобные заболевания.
Помимо перечисленных заболеваний, которые могут принимать эпидемический характер, кишечные палочки могут вызывать аппендицит, перитонит, цистит, пиелонефрит и т.д. В последние годы нередко кишечные палочки самостоятельно или в ассоциациях с другими бактериями вызывают внутрибольничные инфекции в хирургических, педиатрических стационарах и др.
Кишечные палочки, выделяемые от больных различными заболеваниями, как кишечной, так и не кишечной локализации, невозможно различить от представителей нормальной микрофлоры ни по морфологическим, ни по культуральным свойствам. Дифференциация их проводится на основе антигенной структуры.
Главной особенностью ЭПКП является антигенная структура, постоянная и характерная для каждого штамма. Учитывают соматический 0-антиген, соматический К-антиген и жгутиковый Н-антиген.
Общепризнано, что поставить клинический диагноз острой кишечной инфекции нельзя. Обязательна постановка лабораторного диагноза. Основным в лабораторной диагностике является бактериологический диагноз.
Исследуемый материал: испражнения, рвотные массы.
Испражнения в количестве 3–5 гр. помещают в пробирку с изотоническим раствором хлорида натрия или глицериновой смесью. Целесообразно брать последние порции, т.к. при колиэнтеритах поражается тонкий кишечник. У грудных детей материал для исследования берут с пеленок. Чем раньше от начала заболевания исследуют испражнения, тем вероятнее возможность выделения возбудителя. Рекомендуется забор материала сделать до начала лечения.
Бактериологический метод. Бактериологический диагноз основан на выделении чистой культуры и определении её серовара.
Исследуемый материал засевают на среду Эндо, предварительно разведя его физ. раствором. Через сутки изучают колонии, выросшие на среде. Кишечные палочки вырастают на среде Эндо в виде малиново-красных колоний с металлическим блеском или без него. Отбор колоний патогенных кишечных палочек проводят с помощью ориентировочной реакции агглютинации с диагностической сывороткой. Употребляют смесь ОКБ – сывороток против патогенных кишечных палочек, соединяя не более 5 сывороток. Для постановки ориентировочной реакции агглютинации исследуют не менее 10 колоний. Если ни одна из них не агглютинирует, дают ответ: “Патогенные кишечные палочки не обнаружены”. Из колоний с положительной реакцией агглютинации делают посев в пробирки со средой Олькеницкого (Клиглера) или скошенным агаром и ставят в термостат на 18–20 часов.
На следующий день (3 день исследования) просматривают посевы на среде Олькеницкого и скошенном МПА. Состав среды Олькеницкого (трехсахарная среда с мочевиной): к 100 г МПА расплавленного и охлажденного добавляют I г лактозы, I г сахарозы, 0,1 г глюкозы, I г мочевины, 0,02 г соли Мора, 0,03 г гипосульфита и индикатор ВР (водный голубой и розоловая кислота). Среду разливают так, чтобы был столбик и скошенная поверхность. Посев культуры делают штрихом на скошенную поверхность и уколом в глубину столбика. Ферментация глюкозы происходит в анаэробных условиях (её в среде мало), в этом случае цвет изменится только в столбике (среда посинеет). При ферментации лактозы или сахарозы среда посинеет как в столбике, так и на скошенной поверхности. При разложении мочевины (рН сдвигается в щелочную сторону) цвет среды станет оранжевым. Газообразование определяют по разрывам среды. При образовании сероводорода среда чернеет.
На скошенном МПА энтеропатогенные кишечные палочки образуют влажный блестящий сероватый налет.
На среде Олькеницкого кишечная палочка вызывает посинение среды, как в столбике, так и на скошенной поверхности, наблюдаются разрывы среды пузырьками газа (ферментация лактозы и глюкозы до кислоты и газа). Выделенную культуру проверяют в реакции агглютинации на стекле сначала с той же смесью сывороток, а затем раздельно с каждой сывороткой, входящей в смесь.
При отсутствии реакции агглютинации дают отрицательный ответ. При положительной реакции агглютинации необходимо подтвердить принадлежность выделенной культуры к роду кишечных палочек. Для этого культуру засевают на жидкие среды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой, в пробирку с МПБ для обнаружения индола и сероводорода, определяют подвижность.
Для окончательной идентификации выделенной эшерихии ставят развернутую реакцию агглютинации с типовой коли-ОКВ-сывороткой. Реакцию ставят с живой культурой для установления К-антигена и с гретой культурой для установления О-антигена.
По результатам пестрого ряда и развернутой реакции агглютинации может быть дан окончательный ответ.
Серологическая диагностика при кишечных инфекциях используется для подтверждения этиологического значения выделенных эшерихий, заподозренных в качестве возбудителя, в научно-исследовательских целях для изучения патогенеза и иммунитета кишечных заболеваний.
Основана она на обнаружении антител в сыворотке крови. Обнаруживают О-антитела в реакции агглютинации, используя в качестве антигена культуру, выделенную от больного и кипяченую в течение 2 часов. Положительная реакция проявляется непостоянно, титр антител невысокий – ниже 1:100. В-антитела не обнаруживаются.
Можно использовать реакцию пассивной гемагглютинации, которая более чувствительна. В качестве диагностикума используют эритроциты барана, сенсибилизированные смывом 48-часовой культуры, кипяченой 2 часа. Следовательно, в РПГА также выявляют только О-антитела. Эта реакция позволяет отличить больных от людей, выделяющих энтеропатогенные кишечные палочки без клинических проявлений болезни. У последних антитела не обнаруживаются.
Ускоренные методы лабораторной диагностики. Классическое бактериологическое исследование длится 4–5 дней. Это не всегда устраивает и клиницистов и эпидемиологов, поэтому прилагается много усилий, чтобы сократить время исследования и ускорить ответ лаборатории. Для решения этой проблемы предложено использовать наиболее рациональные питательные среды, сокращать интервалы между исследованиями, а также применять методы, основанные на определении антигенной структуры кишечных палочек. Наиболее чувствительным и быстрым методом является метод иммунофлюоресценции, основанный на обнаружении специфического антигена кишечных палочек в исследуемом материале с помощью флюоресцирующих антител.
Этапы бактериологического исследования
при подозрении на эшерихиоз
Первый день
1. Сделать посев испражнений больного на среду Эндо. Для этого взять немного материала пипеткой и эмульгировать его в физиологическом растворе или глицериновой смеси, каплю эмульсии нанести на среду Эндо петлей или пипеткой. Стерильным шпателем растереть каплю на небольшом участке среды, затем, не прожигая шпатель, втереть оставшийся на нем материал по всей поверхности. Чашки с посевом поставить в термостат на 24 часа.
Второй день
2. Изучить посевы на среде Эндо, описать выросшие колонии.
Отобрать малиново-красные колонии с металлическим блеском или без него с помощью ориентировочной реакции агглютинации (не менее 10). Для постановки реакции стерильной петлей взять часть колонии и смешать с каплей агглютинирующей диагностической поливалентной сыворотки. Поливалентные сыворотки готовят в производственных условиях, они содержат антитела к нескольким сероварам эшерихий из одной серологической группы. При положительной реакции агглютинации оставшуюся часть колоний отсеять на скошенный агар или среду Олькеницкого. Если же ни одна из десяти колоний не дала агглютинации, выдать отрицательный ответ.
Третий день
3. Изучить посевы на скошенном агаре и среде Олькеницкого.
3.1. Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле с поливалентной сывороткой. Если реакция агглютинации положительна, поставить реакцию агглютинации на стекле с каждой типовой сывороткой, входящей в поливалентную.
3.2. Подтвердить принадлежность выделенной культуры к эшерихиям. Для этого изучить ферментативные свойства, сделав посев на жидкие среды Гисса с лактозой, глюкозой, маннитом, сахарозой, мальтозой. Сделать также посев на МПБ для определения образования индола и сероводорода.
3.3. Провести окончательную серологическую идентификацию культуры. Для этого поставить развернутую реакцию агглютинации с живой и гретой культурой. Диагностическую типовую сыворотку разводят от 1:100 до титра сыворотки, указанного на этикетке. Из разведений приготовить два ряда пробирок. Приготовить антиген. Для этого смыть культуру с поверхности среды 3–5 мл физиологического раствора, разлить взвесь в 2 стерильные пробирки. Одну из них прогреть на водяной бане при 100°С в течение часа. В первый ряд разведений сыворотки внести по 2 капли живой культуры, во второй – по 2 капли гретой культуры. После встряхивания пробирки поместить в термостат на 18–20 часов.
Четвертый день
Учет результатов. Заключение по исследованию
4.1. Просмотреть посевы на пестром ряду. Для кишечной палочки характерна ферментация лактозы, глюкозы, мальтозы и маннита с образованием кислоты и газа, отсутствие ферментации, сахарозы, образование индола. Учет реакции агглютинации провести с помощью лупы. Агглютинация с живой культурой крупнохлопчатая (Н-агглютинация), с убитой – мелкозернистая (О-агглютинация).
Таблица 3
Источник
Израильские ученые получили штамм кишечной палочки (Escherichia coli), способный к автотрофному питанию, сообщается в Cell. Бактерии, полученные в лаборатории с помощью генной инженерии и селекции, способны создавать органические вещества из углекислого газа в ходе реакций цикла Кальвина. Ожидается, что такая кишечная палочка будет способствовать биосинтезу нужных человеку веществ в промышленных масштабах без отходов в виде диоксида углерода.
Биотехнология давно позволяет внедрять в ДНК бактерий гены других организмов и делать так, чтобы эти гены экспрессировались, а в результате их экспрессии образовывались нужные вещества. Так в промышленных масштабах получают ряд гормонов (инсулин, гормон роста соматотропин), аминокислоты и другие вещества. Большая часть бактерий, которые для этой цели используют, — гетеротрофы. Это означает, что для производства органических веществ им нужны другие органические вещества. Этим они отличаются от автотрофов, которым для создания органики подходит неорганическое сырье — углекислый газ (CO2). Автотрофы поглощают его из воздуха и включают в состав более крупных молекул, такой процесс называется фиксацией углерода.
Учитывая, что содержание CO2 в атмосфере планеты растет, и вместе с этим меняется климат, было бы неплохо перевести биопроизводство на безотходный режим, «научить» бактерии синтезировать органические вещества из углекислого газа, который они же сами (или еще и кто-то другой) и произвели при дыхании. Попытки это сделать уже предпринимали различные группы ученых, но полученным в ходе их экспериментов бактериям для фиксации углерода все же требовались некоторые органические вещества. В лучшем случае такие организмы формировали из диоксида углерода лишь треть биомассы.
Исследователи из Института Вейцмана под руководством Рона Майло (Ron Milo) вывели кишечную палочку, которая может использовать для производства органики только углекислый газ без добавления каких-либо органических веществ. Для этого они добавили в ДНК Escherichia coli гены ферментов, необходимых для реакций цикла Кальвина (в ходе них CO2 превращается в органические вещества), инактивировали часть ферментов, необходимых для нормального обмена веществ гетеротрофам, и поместили полученные бактерии в биореакторы, где атмосфера содержит 10 процентов углекислого газа, а не 0,4 процента, как земная.
Несколько поколений бактерий держали в биореакторах, добавляя в среду некоторое количество сахара ксилозы, чтобы микроорганизмы-гетеротрофы могли выжить. Ксилоза не самый удобный источник углерода, поэтому бактерии, способные получать углерод из углекислого газа, получали в такой среде преимущество. Впервые их выделили из биореакторов через 203 дня после запуска эксперимента, а к 340 дню все бактерии были способны использовать CO2 как материал для построения органических веществ.
Источником энергии для фиксации углерода служила реакция окисления муравьиной кислоты. Хотя это вещество относится к органическим, его атомы E. coli не включали в состав органических молекул, а значит, муравьиная кислота здесь по определению не поддерживала гетеротрофный метаболизм.
A — лабораторная эволюция модифицированных кишечных палочек от бактерий, которым для производства органических веществ нужна ксилоза, до автотрофов, которые получают энергию для синтеза органических веществ за счет окисления муравьиной кислоты (и синтез этот идет только из углекислого газа). B — ход лабораторной эволюции кишечной палочки. Зеленые точки показывают, как менялась доля зависимых от ксилозы бактерий с течением дней
Gleizer et al. / Cell, 2019
Эксперимент показал, что известные бактерии можно в обозримые сроки «настроить» так, чтобы они производили органические вещества только из углекислого газа. Правда, пока полученные кишечные палочки производят больше CO2 при окислении муравьиной кислоты, чем поглощают его для цикла Кальвина. К тому же, нет стопроцентной уверенности, что автотрофных Escherichia coli так же легко получится выращивать в промышленных масштабах, для изучения этого вопроса нужны новые исследования.
Кишечная палочка с измененным метаболизмом: в ней из углекислого газа образуются органические вещества (зеленый цикл), а энергию для этого получают окислением муравьиной кислоты (HCOOH, коричневые стрелки) под действием формиатдегидрогеназы (FDH)
Gleizer et al. / Cell, 2019
Обмен веществ у бактерий очень пластичен, и их геномы легко меняются, благодаря чему возможностями и потребностями этих организмов можно управлять в широких пределах. А E. coli — еще и наиболее изученный микроорганизм. Поэтому неудивительно, что именно на базе ее штаммов создали бактерии с лишними «буквами» в ДНК и, наоборот, клетки с недостающими «словами» генетического кода. Также кишечной палочкой пробовали заменять митохондрии в клетках дрожжей и даже превращали ее в источник жесткого рентгеновского излучения.
Светлана Ястребова
Источник
19.1. Ферменты микробиологического синтеза (ферменты, синтезируемые микроорганизмами)
Получение ферментов из культур
микроорганизмов является перспективным
ввиду неограниченной доступности
исходного сырья – бактерий, грибов и
актиномицетов. Большие возможности
открываются при отборе и искусственном
мутагенезе продуцентов для направленного
биосинтеза определенных ферментов.
Биосинтетические методы отличаются
высокой производительностью за счет
способности микроорганизмов к интенсивному
размножению. Известны бактерли, которые
делятся каждые 30-60 мин, в результате
чего происходит быстрое накопление
целевых продуктов в биомассе или
культуральной среде. Поэтому, несмотря
на ряд лимитирующих факторов, методы
биотехнологии являются экономически
более эффективными, чем методы получения
биологически активных веществ из
дорогого и дефицитного животного сырья.
Биотехнологический процесс включает
большую подготовительную работу: очистку
и стерилизацию воздуха, посуды и
аппаратов; подготовку питательной среды
для биосинтеза и ее стерилизацию;
выращивание посевного материала исходной
культуры. Засев производственной
питательной среды и выращивание
микроорганизмов (продуцентов ферментов)
проводят в ферментаторе. Культивирование
микроорганизмов осуществляют в основном
глубинным способом в жидкой питательной
среде при строго определенном значении
рН, времени и температуры, подавая
стерильный воздух.
Большинство ферментов промышленного
производства относится к внеклеточным,
поэтому накапливаются в культуральной
жидкости, что значительно упрощает их
выделение (схема 19.1). Культуральную
жидкость отделяют от частиц мицелия
фильтрованием через синтетические
ткани, применяемые в пищевой промышленности
и обладающие механической и химической
прочностью. С целью улучшения процесса
фильтрации используют дополнительный
фильтрующий слой из материалов, имеющих
высокие гидродинамические свойства –
перлит, уголь активированный и др. Для
повышения качества фильтрата по цветности
и прозрачности применяют соосажде-ние
мелкодисперсных взвешенных частиц
мицелия и высаливание балластных веществ
аммония сульфатом. Осветление растворов
проводят микрофильтрацией через мембраны
с диаметром пор от 0,45 до 0,8 мкм. Снижение
микробной контаминации осуществляют
стерильной фильтрацией через мембраны
с диаметром пор от 0,1 до 0,3 мкм.
СХЕМА 19.1. Технология ферментов, получаемых
биотехнологическими методами
При выделении изоферментов (внутриклеточных)
основной задачей является сбор клеток,
содержащих фермент, с последующей их
промывкой буферным раствором. Наилучшие
результаты отделения клеток обеспечивает
микрофильтрация через мембранные
фильтры с диаметром пор 0,45 мкм. Осуществляют
ее в тангенциальном потоке, при котором
фильтруемая жидкость подается под
небольшим углом к поверхности мембраны,
что позволяет постоянно смывать слой
частиц, образующихся на ее поверхности.
Его удаление происходит также за счет
высокой скорос ги подачи исходного
раствора в фильтрующую систему. Таким
путем удается переработать большие
объемы растворов и получить
высококонцентрированные суспензии.
Следующей стадией выделения внутриклеточных
ферментов, (например, аспарагиназы,
пенициллиназы) является разрушение
клеток путем механической, гидродинамической
или ультразвуковой дезинтеграции или
лизиса с помощью ферментов и другими
способами. Очищают растворы микрофпльтрацией
через мембранные фильтры с размером
пор 0,22 мкм. Так как целевым компонентом
является фильтрат, то наряду с фильтрацией
в тангенциальном потоке используют и
обычную – через патронные фильтры. Из
растворов ферменты выделяют
фракционированием нейтральными солями
и растворителями, а также изо-электрическим
осаждением.
Одним из прогрессивных методов очистки
является ультрафильтрация, позволяющая
проводить разделение в соответствии с
размером молекул или молекулярной
массой веществ.ч Основной характеристикой
ультрафильтрацпонной мембраны является
средний предел полного деления частиц
глобулярного белка, которые не проходят
через мембрану. Наличие широкого набора
мембран с пределами отсечения от I тыс.
до 1 млн дальтон (обычно I, 10, 30 тыс. и 1
млн) позволяет отделять различные
примеси, очищать, концентрировать и
обессоливать целевой продукт. Ультрафильтра
цпя осуществляется о тангенциальном
потоке, обессоливапне или удаление
низкомолекулярных примесей (м.м. ниже
предела деления мембраны) – в режиме
днафильтрации, т. е. при постоянном
объеме фильтруемой жидкости, за счет
восполнения фильтрата равным объемом
воды или буферного раствора.
Важную роль в технологии выделения и
очистки ферментов играют хроматографическис
методы. Они включают гель-фильтрацию
или эксклюзионную хроматографию, когда
время выхода вещества из хро-матографической
колонки зависит от размера его молекул
или молекулярной массы (более крупные
молекулы не входят в поры сорбента и
элюнруются раньше); ионообменную
хроматографию, разделение при которой
основано на различиях в суммарных
зарядах присутствующих веществ при
данном значении рН
(вещества, имеющие большой заряд,
удерживаются сильнее и элюируются
позже); обращенно-фазовую или гидрофобную
хроматографию, при которой гидрофобные
вещества сильнее связываются с
поверхностью сорбента и элюируются
позже. При очистке ферментов используют
один или несколько из указанных методов
хроматографического разделения.
Перспективной для выделения и очистки
ферментов является аффинная хроматография,
разделение с помощью которой основано
на том, что один из компонентов смеси
обладает повышенной способностью к
связыванию с лигандом, присоединенным
ковалент-ной связью к инертному носителю.
При пропускании смеси белков или
культуральной жидкости через колонку,
заполненную таким сорбентом, молекулы
соединения, обладающие сродством к
лиганду, удерживаются в колонке, в то
время как другие выходят из нее. Вещество
из колонки селективно элюируют с помощью
буфера, содержащего лиганд или его
аналог, иногда с добавлением какого-либо
растворителя.
Препараты ферментов микробиологического
синтеза. Террилитин (Terrilytinum)
-препарат содержит очищенный
протеолитический фермент, получаемый
из культуры плесневого грибаAspergillusterri-cola. Он
первый лекарственный микробный фермент,
освоенный в 1976 г. отечественной
промышленностью по разработкам
Всесоюзного научно-исследовательского
технологического института антибиотиков
и ферментов медицинского назначения
(ВНИТИАФ). Подобно большинству белковых
препаратов микробного происхождения
является комплексным препаратом,
представленным тремя протеазами, из
которых основное содержание, около 90%,
составляет протеаза-1. Молекулярная
масса террилитина 26 800, область стабильности
при значении рН 4,0-9,0.
Террилитин представляет собой
лиофилизирован-ный порошок или пористую
массу белого цвета, легко растворим в
воде, значение рН I% водного раствора
4,8-6,5; активность, выраженная в
протеоли-тических единицах (ПЕ), должна
быть не менее 2 в 1 мг. Препарат выпускают
в герметически укупоренных флаконах
по 200 ПЕ, хранят по списку Б, в сухом,
защищенном от света месте, при температуре
не выше 4°С. Применяют наружно и в виде
ингаляций для расщепления гнойных
экссудатов, некротических тканей, при
лечении гнойных ран, ожогов, заболеваний
верхних дыхательных путей.
Ораза (Orazum)-содержит
комплекс амило-литических (амилазы,
мальтазы) и протеолитическпх ферментов,
получаемых из культуры грибаAspergillusoryzae. Препарат представляет
собой аморфный порошок от светло-желтого
до темно-желтого цвета, растворимый в
воде, устойчив в интервале значений рН
2,5-9,0. Для медицинских целей его получают
из технического продукта амилоризина-ПХ,
высушенной и измельченной поверхностной
культуры плесневого грибаAspergillusoryzae, извлеченной водной
экстракцией с последующей фракционной
очисткой органическими растворителями.
Выпускают препарат в форме гранул по
100 г в стеклянных банках. Хранят в сухом,
прохладном месте. Применяют при
расстройствах пищеварения, протекающих
с угнетением функции пищеварительных
желез.
Солизим (Solizymum) -ферментный
препарат л и политического действия,
полученный из культуры грибаPenicilliumsolitum. Он представляет
собой гигроскопический порошок
светло-коричневого цвета со слабым
специфическим запахом, мало растворимый
в воде и практически нерастворимый в
этаноле, хлороформе, эфире. Область
стабильности при значении рН 6,5-9,5.
Активность препарата определяют по
способности гидролизовать эмульсию
масла оливкового и выражают в ЛЕ
(липолитических единицах).
Солизим выпускают в таблетках с
содержанием 20 000 ЛЕ. Таблетки получают
гранулированием со-лизима и сахара 5%
раствором ПВП в хлороформе в установке
с псевдоожижением вещества, сушат при
температуре не выше 40°С, покрывают
оболочкой из ацетилфталилцеллюлозы в
спирто-ацетоновом растворе с добавлением
красящих веществ. Благодаря оболочке
таблетки выделяют фермент лишь в верхних
отделах кишечника. Хранят в сухом,
защищенном от света месте, при температуре
не выше 4°С. Применяют при хронических
заболеваниях желудочно-кишечного тракта
и панкреатитах.
Стрептолиаза (Streptoliasum) –
препарат, содержащий фермент стрептокиназу,
получаемый из культуры ^-гемолитического
стрептококка группы С. Лиофиллизированный
препарат представляет собой пористую
массу белого цвета, легко растворимую
в воде. Активность стрептолиазы выражают
в ЕД. За ЕД принимают количество,
лизирующее в определенных условиях
сгусток фибрина, образованный смесью
растворов фибриногена и тромбина.
Выпускают в ампулах по 250 000 и 500 000 ЕД.
Хранят при температуре от 4 до 10°С.
Применяют в качестве фибрпно-литпческого
(тромболитического) средства. Недостатком
является малая стабильность в организме:
период полураспада стрептокипазы
составляет 20-80 мим, ввиду чего препарат
вводят внутривенно (в необходимых
случаях – внутриартериально) капельно
на протяжении 16-18 ч. Высокая иммунная
активность является причиной побочных
эффектов (озноб, лихорадка, аллергические
реакции). Препарат стрептокипазы,
лишенный указанных недостатков, получен
ее иммобилизацией на водорастворимой
полисахаридной матрице (см. стрептодеказу).
А с п а р а г и 11 а з a(Asparaginasum) -L-acna-рагипаза
(L-аспарагин-аминогидролаза)
– фермент, расш.епляющпй аспарагин на
кислоту аспарагииовую и аммиак.
Продуцируется разными штаммами кишечной
палочки (Escherichiacoli).
Технология парентерального препаратаL-аспарагнназы из Е.coliразработана совместными исследованиями
Института органического синтеза (ИОС)
АН Латвийской ССР и ВНИИ антибиотиков.
Он представляет собой белый аморфный
порошок, легко растворимый в воде и
изотоническом растворе нагрия хлорида.
В качестве стабилизатора содержит
глицин. Активность выражается в
международных единицах действия (ME).
За МЕ принято количество фермента,
освобождающее 1 мкмоль аммиака из
аспарагина за 1 мин. Препарат выпускают
в -лиофилизированном виде во флаконах,
содержащих по 3000 и 10 000MEL-аспарагииазы для инъекций.
Хранят по списку Б, при температуре не
выше 10°С. Применяют при лечении острой
лимфо-бластической лейкемии. Действие
основано на том, что некоторые опухоли
и лейкемические клетки не синтезируют
аспарагин и поэтому нуждаются в его
поступлении извне, например с пищей.
ВведениеL-аспарагиназы
позволяет искусственно ограничить
поступление в опухоли указанной
аминокислоты и подавляет их рост.
П е н и ц и л л и н а з a(Penicillinasum) – ФеР~ мент,
продуцируемыйBacilluslecheniformisштамм
749/с. Представляет собой белый аморфный
гигроскопический порошок, легко
растворимый в воде. Активность препарата
выражается в ЕД. За ЕД принимают его
наименьшее количество, способное
инактивировать 10»’ моля (около 60 ЕД)
бензил-пенициллина в 1 мл фосфатного
буфера в течение 1 ч при температуре
37°С. Препарат выпускают в герметически
укупоренных флаконах или ампулах по
500 ООО и 1 ООО ООО ЕД. Хранят при комнатной
температуре. Применяют при острых
аллергических реакциях и анафилактическом
шоке, вызванных препаратами группы
пенициллина.
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
- #
Источник