Рост кишечных палочек и стафилококков

План ответа макропрепарата.

Название
Ингредиенты
Назначение
Наблюдаемый результат

Рост кишечных палочек на среде Эндо.

Среда Эндо – дифференциально-диагностическая среда. В составе среды: лактоза и индикатор кислотности – фуксин. Среда предназначена для выделения (преимущественно из кала и мочи) и дифференциации микроорганизмов семейства Enterobacteriaceae. Лактозопозитивные кишечные палочки, входящие в состав нормальной микрофлоры кишечника растут колониями малиново-красного цвета с металлическим блеском, так как расщепляют лактозу и изменяют рН среды. Лактозоотрицательные микроорганизмы (некоторые патогенные кишечные палочки, шигеллы, сальмонеллы) растут колониями белого или светло-розового цвета.

Рост кишечных палочек и дизентерийных палочек на среде Плоскирева.

Среда Плоскирева – дифференциально-диагностическая среда. Это селективная среда для выделения шигелл и сальмонелл. Готовая среда прозрачна, имеет розовато-желтоватый цвет. Среда Плоскирева относится к плотным средам для выделения чистых культур. В состав среды Плоскирева входят ингибирующие вещества (желчные соли, бриллиантовый зеленый, йод), вследствие чего она должна полностью подавлять рост грамположительной флоры, значительно задерживать (первые 24 ч) рост эшерихий и другой сопутствующей микрофлоры, подавлять роение протея. Дифференцирующие свойства агара Плоскирева основаны на изменении рН в кислую сторону при росте лактозоферментирующих бактерий, которые образуют колонии брусничного цвета (индикатор нейтральный красный). Лактозоотрицательные бактерии вырастают в виде бесцветных или слабоокрашенных колоний.

Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА).

Эта реакция относится к серологическим реакциям иммунитета между антигенами (АГ) и антителами (АТ). Детерминанта АГ связывается с активным центром АТ. Соединение АГ и АТ осуществляется посредством водородных и гидрофобных связей, взаимодействия ионов, кулоновских и ван-дер-вальсовых сил. Прочность соединения АГ с АТ обеспечивается не только силами связывания, но и оптимальной стерической адаптацией активного центра АТ к АГ-детерминанте.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА; син. реакция пассивной гемагглютинации) – метод обнаружения и идентификации антигенов или антител, основанный на возникающем в их присутствии феномене агглютинации эритроцитов, на поверхности которых были предварительно адсорбированы соответствующие специфические антитела или антигены.

Серологический метод. Сыворотка крови обследуемого пациента (содержит неизвестные (искомые) АТ). Эритроцитарный диагностикум – содержит известный антиген, адсорбированный на поверхности эритроцита. Образование комплекса АГ-АТ влечет за собой и склеивание эритроцитов, что легко учитывать. Таким образом, эритроциты не участвуют непосредственно в образовании комплекса АГ-АТ, служат для укрупнения корпускула и соответственно являются индикаторами наличия комплекса АГ-АТ. РНГА более чувствительна, чем РА.

РНГА может использоваться как экспресс-метод, например при диагностике чумы или газовой гангрены. Ингредиенты: исследуемый материал – неизвестный АГ, диагностикум эритроцитарный антительный (содержит известные АТ адсорбированные на поверхности эритроцита). Образование комплекса АГ-АТ влечет за собой и склеивание эритроцитов, что легко учитывать.

Определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом индикаторных дисков.

Важное значение в лечении и профилактике инфекционных заболеваний принадлежит химиотерапии и химиопрофилактике, эффективность которых в значительной степени зависит от чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. Среди химиотерапевтических средств, используемых для лечения больных с гнойно-септическими инфекциями, ведущее место занимают антибиотики.

Для определения чувствительности выделенных микроорганизмов к антибиотикам широко используется диско-диффузионный метод. Исследуемую культуру суспензируют в стерильном физиологическом растворе приготовляя 1-миллиардную взвесь по стандарту мутности. Бактериальную взвесь (1 мл) стерильной пипеткой наливают на поверхность плотной питательной среды в чашку Петри и равномерно распределяют шпателем. Избыток жидкости удаляют пипеткой. Шпатель и пипетки помещают в стакан с дезраствором. На засеянную поверхность стерильным пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга и отступя 2 см от края чашки бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам. Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундируюшим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин).

Персистентные свойства микроорганизмов – антилизоцимная активность (АЛА).

АЛА – секреторный фактор персистенции. Изучают АЛА по методике О.В. Бухарина с соавт. (1984). Для этого к 1,5% питательному агару добавляют различные дозы яичного лизоцима (от 1 до 5 мкг) и разливают в чашки Петри. После застывания среды на подсушенную поверхность наносят каплю 1 млрд. взвеси суточной агаровой культуры изучаемого микроорганизма. Чашки инкубируют в термостате при 370С 24 часа, после этого выросшие колонии подвергаются обработке парами хлороформа в течение 20 минут, затем наслаивается слой 0,7% питательного агара с 0,1 мл 1 млрд. взвеси суточной агаровой культуры Micrococcus luteus (lysodeikticus) АТСС 15307 (ГИСК им. Тарасевича) чувствительной к литическому действия лизоцима. Учет результатов проводится через 24 часа инкубации в термостате по наличию зоны роста микрококка вокруг тех штаммов, которые нейтрализуют внесенный в слой агара яичный лизоцим. Антилизоцимную активность выражают в мкг инактивированного в среде лизоцима.

На данной чашке видны колонии АЛА+ и АЛА- штаммов микроорганизмов. Над колониями АЛА+ штаммов есть рост микрококка в виде мелких желтых колоний.

Лизоцимная активность.

Лизоцим –термостабильный белок, фермент, разрушает клеточную стенку преимущественно грамположительных бактерий, разрывая β-гликозидные связи между аминосахарами пептидогликана, что способствует образованию протопластов с последующим их лизисом. Содержится во всех тканевых жидкостях, в лейкоцитах, макрофагах и других фагоцитирующих клетках. Продуцируется лизоцим преимущественно клетками моноцитарно/макрофагального ряда. Лизоцим усиливает антибактериальную активность комплекса антиген (микроб)-антитело-комплемент, способствуя лизису пептидогликана клеточной стенки бактерий. Помимо животного раличают растительный и микробный лизоцим.

Микробный лизоцимявляется одним из факторов колонизации. Лизоцимная активность (ЛА) определяется путем посева исследуемой культуры микроорганизма на питательную среду, содержащую 1 млрд. суспензию суточной агаровой культуры Micrococcus luteus (lysodeikticus) АТСС 15307 (ГИСК им. Тарасевича). Результат оценивается после инкубации при 370С в течение суток по зоне лизиса в толще среды индикаторного штамма микрококка вокруг изучаемых колоний.

Иммуноферментный метод

Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА, англ. enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) — лабораторный иммунологический метод качественного или количественного определения различных соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая реакция антиген-антитело. Выявление образовавшегося комплекса проводят с использованием фермента в качестве метки для регистрации сигнала.

ИФА появился в середине 60-х годов и первоначально был разработан как метод для идентификации антигена в гистологическом препарате, а также для визуализации линий преципитации в тесте иммунодифузии и иммуноэлектрофореза, а затем стал использоваться для количественного определения антигенов и антител в биологических жидкостях. В разработке метода принимали участия Е. Энгвалл и Р. Пэлман, а также независимо от них В. Ван Вееман и Р. Шурс.

Метод основан на специфическом связывании антитела с антигеном, при этом один из компонентов конъюгирован с ферментом, в результате реакции с соответствующим хромогенным субстратом образовывается окрашенный продукт, количество которого можно определить спектрофотометрически.

Открытие возможности иммобилизации антигена и антитела на различных носителях с сохранением их связывающей активности позволило расширить использование ИФА в различных областях биологии и медицины.

Появление моноклональных антител послужило дальнейшему развитию ИФА, что позволило повысить его чувствительность, специфичность и воспроизводимость результатов.

Теоретически ИФА основывается на данных современной иммунохимии и химической энзимологии, знании физико-химических закономерностей реакции антиген-антитело, а также на главных принципах аналитической химии. Чувствительность ИФА и время его проведения определяется несколькими основными факторами: кинетическими, термодинамическими характеристиками реакции антиген-антитело, соотношением реагентов, активностью фермента и разрешающей способностью методов его детекции. В общем виде реакция антиген-антитело может быть описана простой схемой: [AT]+[АГ]↔[АТАГ]

Разнообразие объектов исследования от низкомолекулярных соединений до вирусов и бактерий, а также необычайно широкий круг задач, связанных с многообразием условий применения ИФА, обусловливают разработку чрезвычайно большого количество вариантов этого метода.

Любой вариант ИФА содержит 3 обязательные стадии:

1. стадия узнавания тестируемого соединения специфическим к нему антителом, что ведет к образованию иммунного комплекса;

2. стадия формирования связи конъюгата с иммунным комплексом или со свободными местами связывания;

3. стадия превращения ферментной метки в регистрируемый сигнал.

Принципальная схема иммуноферментного анализа для выявления АТ является следующей. Известный АГ (вирус, белок) – диагностикум фиксируется на твердой фазе. К нему добавляют сыворотку обследуемого с неизвестными АТ. После инкубации и промывки на антигене остаются специфичные к нему АТ, если таковые имелись в сыворотке обследуемого. Для обнаружения комплекса АГ-АТ, к нему добавляют кроличью антиглобулиновую сыворотку меченую ферментом (АГС-Ф). Для получения данной сыворотки иммунизируют кролика глобулинами человека. Полученную от кролика сыворотку метят каким-либо ферментом, например, пероксидазой хрена. Если в обследуемой сыворотке есть АТ к АГ (диагностикум), то они будут служить антигеном для антиглобулиновой сыворотки. После второй промывки образовавшийся комплекс АГ+АТ+АГС-Ф можно обнаружить, добавив субстрат на фермент (перекись водорода) и индикатор на продукты расщепления субстрата (хромоген на активные формы кислорода). Изменение цвета индикатора свидетельствует о наличии искомых АТ в сыворотке обследуемого.

Среда Китта-Тароцци.

Питательный бульон с глюкозой и кусочками свежих органов животных. Глюкоза и кусочки органов обладают редуцирующей способностью. Сверху среду заливают слоем стерильного масла, которые не пропускает кислород из воздуха в среду. В результате создаются условия для культивирования анаэробных микроорганизмов.

План ответа макропрепарата.

Название
Ингредиенты
Назначение
Наблюдаемый результат

Рост кишечных палочек на среде Эндо.

Рост кишечных палочек и дизентерийных палочек на среде Плоскирева.

Рост стафилококка на кровяном агаре.

Кровяной агар (КА) – сложная плотная питательная среда для культивирования прихотливых видов микроорганизмов и выявления гемолизинов (определения у МО одного из факторов вирулентности – гемолитической активности). На 100 мл расплавленный и остуженный до 450С мясо-пептонный агар (МПА) добавляют 5 мл отмытых эритроцитов барана или эритроцитарной массы крови человека (I группы), аккуратно перемешивают, разливают в чашки Петри. На поверхность застывшего и подсушенного КА засевают чистую культуру исследуемых микроорганизмов, после суточной инкубации при 370С определяют зоны гемолиза вокруг выросших колоний. Зоны гемолиза виды в виде полного (β-гемолиз) или частичного (α-гемолиз) просветления вокруг колоний. На данной чашке видны колонии стафилококков бело-серого цвета с зонами полного просветления вокруг, что свидетельствует о наличии у этих микроорганизмов гемолитической активности.

4. Реакция преципитации в агаре для определения токсигенности дифтерийной палочки.

Реакция преципитации относится к реакции иммунитета между антигенами (АГ) и антителами (АТ). Детерминанта АГ связывается с активным центром АТ. Соединение АГ и АТ осуществляется посредством водородных и гидрофобных связей, взаимодействия ионов, кулоновских и ван-дер-вальсовых сил. Прочность соединения АГ с АТ обеспечивается не только силами связывания, но и оптимальной стерической адаптацией активного центра АТ к АГ-детерминанте.

Серологические реакции протекают в две фазы. Первая – специфическая невидимая, – заключается во взаимодействии АГ с АТ. Вторая фаза – видимая, – проявляется в зависимости от типа реакции, который определяется свойствами АГ, АТ и другими ингридиентами реакций. В реакции преципитации (РП) участвует растворенный антиген. При контакте с антителами – преципитинами образуется осадок. Реакцию преципитации можно проводить в жидкой среде (в пробирках) и в геле (в чашках Петри).

Одной из разновидностей РП в геле является реакция определения токсигенности дифтерийной палочки. Для этого в чашку Петри на питательную среду помещают полоску стерильной фильтровальной бумаги, пропитанную антитоксической противодифтерийной сывороткой. Эта сыворотка содержит АТ к дифтерийному токсину, получается путем иммунизации животного (кролика) анатоксинами (токсин лишенный вирулентности-токсигенности, но сохранивший иммуногенность-антигенность). Затем на плотнуб питательну среду в чашке высевают испытуемые культуры в виде пятачков на расстоянии 0,6-0,8 см от края фильтровальной бумаги. Чашки инкубируют при 370С в течение суток. При наличии токсигенной культуры в месте взаимодействия токсина с антитоксином образуются линии преципитации в виде дуг. Дуга – это визуальное отображение взаимодействия АТ диффундирующих из фильтровальной бумаги и АГ – экзотоксинов, выделяемых токсигенными культурами.

Источник

Стафилококки – бактериальные патогены человека, ответственные за многие заболевания и колонизацию кожи и слизистых оболочек. Эти бактерии не образуют спор и не двигаются, но они могут иметь надежную оболочку.

Основным резервуаром золотистого стафилококка является человек. Наиболее часто обитаемые части тела – преддверие носа, носоглотка, анальная область, кожа, граничащая с волосами на голове и области челюсти.

Виды стафилококков, патогенных для человека

В настоящее время известно 32 вида стафилококков, из которых 16 – возбудители заболеваний у человека. Наиболее распространенные:

золотистый стафилококк;
эпидермальный стафилококк;
стафилококк гемолитический;
стафилококк сапрофитный;
стафилококк lugdunensis.

В диагностических целях стафилококки делятся на основе способности продуцировать фермент коагулазу в коагулазо-позитивные и коагулазо-негативные виды. Из коагулазо-позитивных видов ответственен за человеческие инфекции Staphylococcus aureus. Наиболее патогенные для человека Staphylococcus aureus и коагулазонегативный Staphylococcus lugdunensis.

Классификация стафилококков по патогенности

Staphylococcus aureus, помимо различных факторов вирулентности, определяющих патогенность этого микроорганизма, создал множество механизмов устойчивости к антибактериальным препаратам, что делает его одним из самых опасных патогенов человека. Важную роль в процессе эпителиальной колонизации играет полисахаридное покрытие.

Золотистый стафилококк производит цитолитические токсины и ферменты, способствующие распространению этого микроорганизма, и вызывают повреждение тканей. Особую группу составляют токсины так называемые суперантигены, в т.ч. exfoliatins, также называемые эпидермолитическими токсинами или токсинами шока.

Важный механизм патогенности золотистого стафилококка – способность создавать биопленку, то есть слой бактериальных клеток, покрытый веществом, которое препятствует доступу к ним антибиотиков. Коагулазонегативные стафилококки состоят из более 30 видов. В большинстве случаев они вызывают внутрибольничные инфекции. Исключение составляют штаммы Staphylococcus saprophyticus, ответственные за инфекции мочевыводящих путей, чаще всего у женщин с детородным потенциалом.

Госпитальные инфекции, вызванные коагулазонегативными стафилококками, особенно актуальны для пациентов с нарушенным иммунитетом. Наиболее важными факторами риска являются: сосудистые катетеры или имплантаты, а также широкое использование антибиотиков.

В целом инфекция развивается медленно. Часто существует длительный латентный период между инфекцией, например, полученной при внедрении имплантата, и появлением клинических признаков инфекции.

Как часто возникают стафилококковые инфекции?

Эпидемиологические данные чаще всего относятся к внутрибольничным инфекциям, которые в настоящее время называют инфекциями, связанными со здравоохранением (HCAI). Повышенный риск заражения относится к пациентам после операции (заражение места операции), с ожоговыми ранами, с сосудистыми катетерами, имплантированными протезами, а также проходящим длительную антибактериальную терапию.

Источниками микробов в больнице являются как пациенты, так и персонал, особенно при стафилококковых поражениях кожи или инфекциях, а также хронические носители. Передача в основном происходит через руки персонала. Капельный путь встречается гораздо реже. Такая передача может также происходить от пациентов со стафилококковой пневмонией.

Инфекции Staphylococcus aureus может быть спорадической инфекцией или вспышкой. В случае вспышки необходимо как можно скорее провести эпидемиологическое расследование. Наибольшая угроза эпидемического распространения золотистого стафилококка существует в отделениях неонатологии, интенсивной терапии, хирургии и ожоговых.

Симптомы и формы стафилококковых инфекций

Инфекции, вызываемые золотистым стафилококком, могут быть локальными или генерализованными. Существует также группа заболеваний, вызванных стафилококковыми токсинами.

Местные стафилококковые инфекции

При местном инфицировании в основном поражаются кожные и подкожные ткани, для которых характерны гнойные выделения.

Наиболее распространенные стафилококковые заболевания:

импетиго;
фолликулит;
фурункулы;
эритематоз (множественные фурункулы);
абсцессы;
воспаление потовых желез;
воспаление молочных желез.

Воспаление молочных желез

Реже золотистый стафилококк вызывает воспаление подкожной клетчатки и фасции. Особенно опасная форма инфекции подкожной клетчатки – некротический фасциит, который требует немедленного хирургического вмешательства и дренирования, поскольку заболевание может быть молниеносным и часто смертельным. Штаммы, вызывающие это заболевание, часто продуцируют токсин, ответственный за острую клиническую картину.

Золотистый стафилококк является наиболее распространенной причиной бактериального конъюнктивита. Также Staphylococcus aureus вызывает различные респираторные инфекции, такие как отит и синусит, особенно хронические. Staphylococcus aureus может вызывать периневральные абсцессы, и в этом случае требуется хирургическое вмешательство.

Инвазивные стафилококковые инфекции

Наиболее тяжелые инвазивные инфекции с высокой смертностью включают сепсис и эндокардит, относящиеся к естественным клапанам или связанные с наличием сосудистых протезов сердца, а также различных типов сосудистых катетеров. Бактерии могут попадать в кровяное русло непосредственно во время травмы или операции или путем преемственности локализованных первичных инфекций.

Инфицирование крови может вызвать вторичные инфекции в различных органах и системах, в первую очередь в легких, почках, центральной нервной системе, опорно – двигательном аппарате. Смертность может достигать 50% случаев.

Стафилококковая пневмония встречается редко, но является одной из наиболее серьезных инфекций этого типа. Такое осложнение чаще наблюдается во время эпидемии гриппа, а также у госпитализированных пациентов, особенно находящихся на респираторной терапии.

Staphylococcus aureus является важным этиологическим фактором острого первичного остеоартроза во всех возрастных группах, кроме новорожденных. У взрослых инфекция чаще всего поражает кости позвоночника, а у детей длинные кости.

Острый первичный остеоартроз

Staphylococcus aureus также является основным этиологическим фактором хронического остеита. Особенно распространены стафилококковые инфекции при протезировании и инфекции суставных капсул.

Инфицирование Staphylococcus aureus центральной нервной системе обычно происходит через кровоток, через преемственность из инфицированных тканей или в результате прямого проникновения микроорганизма, например, в результате нейрохирургических процедур.

Золотистый стафилококк редко отвечает за инфекции мочевыводящих путей, включая абсцессы почек.

Токсические стафилококковые инфекции

Золотистый стафилококк производит много токсинов, которые ответственны за определенные заболевания.

Токсический шок. Вызван токсическим стафилококковым токсином (Токсический шок стафилококкового токсина – ЦСТ). Первоначально считалось, что стафилококковый токсический шок поражает только женщин, использующих вагинальные тампоны. Однако оказалось, что это может происходить во всех возрастных группах, включая мужчин. Токсический шок является серьезным, угрожающим жизни состоянием, характеризующимся высокой температурой, снижением артериального давления, нарушением работы органов и диффузными поражениями кожи, отслаивающимися через 1-2 недели. Кроме того, наблюдаются боли в мышцах, рвота и диарея. Токсический шок также может развиться у людей, колонизированных токсинобразующим штаммом.
Синдром обожженной кожи (SSSS) – болезнь Риттера и Лайелла. Включает кожные заболевания различной степени тяжести, вызванные токсинами, называемыми эксфолиантами. Заболевание чаще всего встречается у новорожденных и младенцев в возрасте до 3 месяцев, очень редко у взрослых. Токсины вызывают появление тонкостенных пузырьков, которые легко лопаются, а также отслаивание эпидермиса, что приводит к обнажению дермы. Клинические симптомы в первую очередь: лихорадка, раздражительность, отсутствие аппетита, легкая сыпь, покрывающая всю поверхность тела в течение нескольких дней. Диагноз основывается на клинических симптомах, в том числе положительный кожный симптом Никольского.
Энтеротоксины. Ответственны за пищевое отравление. Пищевое отравление происходит в результате потребления пищи, в которой пролиферируют и выделяют энтеротоксины стафилококки. Механизм действия энтеротоксинов до конца не изучен. Предполагается, что рвота является результатом активации рвотного центра спинного мозга в головном мозге, а не местного воздействия на слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта. Тошнота и рвота начинаются через 2–6 часов после инфицирования. Затем появляются боли в животе и диарея.

Высокая температура при токсическом шоке

Коагулазонегативные стафилококковые инфекции

Благодаря способности возбудителя прилипать к различным тканям, могут колонизировать их, а затем, в результате образования внеклеточной слизи, образовывать биопленку на их поверхности. В этой ситуации лечение антибиотиками может быть неэффективным, и биоматериал должен быть удален.

Наиболее серьезные инфекции, вызванные Staphylococcus epidermidis, включают инфекции у людей с сосудистыми катетерами, суставными протезами и сердечными клапанами, системами дренирования спинномозговой жидкости и кардиостимуляторами.

Стафилококк эпидермиса и другие коагулазонегативные стафилококки являются наиболее распространенными этиологическими факторами эндокардита у пациентов с искусственными клапанами. Они также вызывают внутрибольничные инфекции мочевыводящих путей, которые могут протекать бессимптомно. Чаще всего встречаются у катетеризованных пациентов с нейрогенным мочевым пузырем, камнями в почках и после операций на мочевых путях.

Если у вас появились симптомы стафилококковой инфекции, обратитесь к врачу.

Как определяется диагноз стафилококковой инфекции

Диагностика стафилококковых инфекций проводится на основании клинических симптомов и результатов микробиологических исследований, в которых получены стафилококки.

В случае пищевого отравления подозрительные продукты могут быть отправлены в микробиологическую лабораторию для обнаружения токсина или штамма, вырабатывающего токсин.

Как лечить стафилококковую инфекцию?

Антибиотики используются для лечения стафилококковых инфекций. Растущая устойчивость бактерий к определенным группам антибиотиков является большой проблемой. .

Антибиотики для лечения стафилококковых инфекций

Можно ли полностью вылечить стафилококковые инфекции?

Вылечить стафилококковые инфекции полностью можно. Но иногда, чтобы полностью удалить бактерии из организма, необходимо удалить протезы, например, протезы суставов.

Что нужно делать после лечения стафилококковой инфекции?

Конкретных рекомендаций по лечению после стафилококковой инфекции нет.

Что делать, чтобы избежать заражения стафилококком?

Политика по снижению заболеваемости внутрибольничными инфекциями в основном направлена на предотвращение стафилококковых инфекций. Основной способ избежать заражения – использовать стандартную изоляцию контактов.

Поделиться ссылкой:

Источник