Серологический метод диагностики кишечной инфекции

Каждый из нас на протяжении своей жизни хотя бы раз сталкивался с инфекционными заболеваниями. Все они вызываются большим количеством патогенных агентов: бактериями, вирусами, простейшими и грибами. Микробиология насчитывает миллионы микроорганизмов, способных привести к развитию инфекции у человека.

Некоторые из них являются условно-патогенными, другие — облигатными возбудителями болезней. В медицине существует огромное количество лабораторных методов, позволяющих выявить патоген. Каждый из них обладает своими недостатками и преимуществами. Большое значение имеет чувствительность и точность метода.

Самыми часто используемыми методами являются генно-молекулярные и серологические исследования. Пациенты, получая направление на молекулярные и серологические исследования, задумываются, что это такое и считают, что это очень сложное обследование. На самом деле процесс сдачи анализа не превышает 5 минут, а информативность колеблется в пределах 95-100%.

Что такое серологический анализ

Серологические реакции являются важным инструментом для выявления причины инфекционного заболевания. Серодиагностика — специфический анализ крови, который основан на взаимодействии антигенов и антител в сыворотке.

Антитела представляют собой белковые молекулы, образующиеся в организме человека через несколько дней после контакта с патогеном. Они являются строго специфичными для каждой инфекции и вырабатываются для уничтожения возбудителя. Распознавание этих белковых фракций позволяет быстро выявить и микроорганизм, к которому они образовались. Антигены же представляют собой чужеродные белки, содержащиеся в бактериях. Синтезированное антитело находит в крови антиген и прочно связывается с ним, не позволяя ему губительно влиять на организм.

Реакция связывания этих двух белков с образованием единого комплекса лежит в основе применения всех серологических реакций. Для поиска антител используются особые стандартные растворы с антигенами возбудителей (диагностикумы), которые добавляют к исследуемой крови. Серодиагностика определяет все белковые маркеры инфекций, а последующая расшифровка результатов дает информацию еще и о продолжительности заболевания. Эта особенность характерна только для серологического анализа, что делает его методом выбора во многих клинических ситуациях.

Преимущества и недостатки

Серологический метод лабораторной диагностики имеет большое количество плюсов, что глубоко внедрило его в практическое использование во всех отраслях медицины: гинекологию, урологию, инфектологию и венерологию.

Серодиагностика является общедоступным анализом, позволяющим быстро получить точные результаты. Она не требует длительной подготовки к забору материала и легко переносится всеми пациентами. Для забора венозной крови от пациента требуется соблюдать диету лишь в течение 48 часов. Серологические реакции также обладают высокой специфичностью (100%), чувствительностью (95%) и точностью (90-95%).

Но этот анализ венозной крови требует больших затрат дорогих диагностикумов, что влияет и на его себестоимость. Некоторые возбудители обладают слабой иммуногенностью, то есть в организме к ним вырабатывается мало антител, поэтому проведение серодиагностики невозможно. Кроме того, метод значительно реже используется при вирусных инфекционных патологиях, уступая по эффективности ПЦР-анализу.

В каких случаях назначают

Серологическое лабораторное исследование крови назначают для диагностики инфекционных заболеваний: бактериальных, вирусных, протозойных, паразитарных и микст-инфекций. Наиболее широко выявление антител используется в акушерско-гинекологической и урологической практике. В урологии это лабораторное исследование используется при уретритах неясной этиологии, баланитах и баланопоститах. В гинекологии направляют на обследование при любом воспалительном процессе репродуктивной системы (вульвовагиниты, кольпиты, цервициты и эндометриты).

В акушерстве каждой беременной женщине назначают анализ венозной крови с целью исключения заболеваний, опасных для плода. Эти инфекции носят название «TORCH-комплекс» и определяются с помощью серологических реакций. ТОРЧ-инфекции вызывают у развивающегося плода пороки развития, часто несовместимые с жизнью. Именно поэтому ранняя и точная диагностика этих инфекций является основной целью акушера-гинеколога. Серология проводится и при подозрении на мужское или женское бесплодие по причине инфекционной патологии.

Если врач подозревает у пациента наличие инфекции, передающейся половым путем, то требуется прохождение комплексного обследования, включающего серодиагностику. Если у одного из партнеров найдено заболевание из группы ИППП, то второму партнеру необходимо пройти исследование, даже если у него нет клинических симптомов.

Методы диагностики

Серологические реакции включают в себя несколько разновидностей. Все они основаны на поиске антител (иммуноглобулинов) и антигенов, но проводятся разными способами и имеют разные диагностические критерии постановки диагноза. Серологические методы лабораторного исследования в зависимости от методики проведения делятся на простые и сложные. Классификация основана на том, сколько белков необходимо найти: простые реакции определяют только антитела или антигены, а сложные — комплексы «антиген + иммуноглобулин». Сложный метод исследования более предпочтителен, потому что чувствительность анализа значительно выше.

Чаще всего в лабораториях серологическая диагностика представлена следующими иммунохимическими серореакциями:

• реакция иммунофлюоресценции (РИФ);
• иммуноферментный анализ (ИФА);
• реакция непрямой гемагглютинации (РНГА);
• реакция связывания комплемента (РСК).

Эти виды исследования относятся к сложным серореакциям и обладают значительными преимуществами перед остальными. Они проводятся крайне быстро, имеют высокую точность диагностики болезней и не требуют длительной подготовки: от пациента требуется только сдать анализ венозной крови.

Иммунофлюоресцентная реакция РИФ

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ), или анализ Кунса – метод экспресс-обнаружения антигенов патогенного агента в биоматериале пациента. Для проведения РИФ используется специальный краситель – флюорохром, способный светиться под люминесцентным микробиологическим микроскопом. Флюорохром добавляют в диагностическую сыворотку со строгим соблюдением концентрации, иначе реакция может показать ложные результаты. Иммунофлюоресцентная реакция бывает двух видов: прямая и непрямая.

Прямая реакция Кунса выявляет только антигены возбудителя. Для их определения в биоматериал добавляют диагностическую сыворотку, состоящую из антител и флюорохрома. Антигены, находящиеся на клеточной стенке возбудителя, связываются с окрашенными антителами. Врач лабораторной реакции рассматривает предметное стекло под микроскопом и видит ярко-зеленое свечение. Типичным примером такой реакции является выявление хламидий, контрастированных синькой Эванса.

Непрямая РИФ (РНИФ) определяет антигенно-антительные комплексы. Для этого врач последовательно добавляет в образец сначала немеченые иммуноглобулины, чтобы они связались с антигенами. Затем к образованным иммунным комплексам добавляется новая сыворотка, содержащая уже меченные красителем антитела к недавно образовавшимся комплексам. Наиболее часто прямая реакция используется для диагностики вирусных болезней.

Единственным недостатком данных реакций является некоторая степень субъективизма при учете результатов: одна и та же интенсивность свечения иногда расценивается врачами по-разному, что в итоге приводит к ложным данным лабораторного обследования.

Реакция непрямой гемагглютинации РНГА

РНГА — анализ, направленный на выявление иммуноглобулинов или антигенов в различных биологических жидкостях. Реакция непрямой гемагглютинации является одним из самых точных методов для определения титра иммуноглобулинов, что позволяет судить о стадии инфекционного процесса. Нарастание титра иммуноглобулинов в 4 раза в двух анализах крови, взятых с промежутком в несколько недель, говорит об остром инфекционном процессе бактериальной или вирусной этиологии. РНГА дает возможность лечащему врачу назначить правильную медикаментозную терапию с учетом стадии заболевания. Широкое распространение исследование получило для выявления ИППП, менингококковой инфекции, ботулинический токсина (ботулотоксина) и большинства вирусных инфекций.

Для проведения исследования используются красные клетки крови – эритроциты, на поверхности которых расположены антигены или антитела. Сыворотка носит название антигенного или антительного эритроцитарного диагностикума. Диагностикум добавляют к исследуемой крови, затем наблюдают за реакцией. При присоединении этих эритроцитов к антигенам или иммуноглобулином крови образуются комплексы, а красные кровяные клетки начинают выпадать в осадок. При отрицательном анализе эритроциты скапливаются в виде небольшого пятна в виде пуговицы. Если же на дне пробирки или планшетки образовался осадок с фестончатыми краями в виде зонтика, то реакция считается положительной.

Сложность в проведении этого серологического теста заключается в необходимости точного приготовления эритроцитарного диагностикума и строгого соблюдения концентраций используемых компонентов.

Иммуноферментный анализ ИФА

Метод иммуноферментного анализа считается самой точной, специфичной и чувствительной серореакцией. Учет результатов ИФА автоматизирован, а человеческий фактор и субъективная оценка данных исключена. Точность результата достигает 98%, а при повторном исследовании – 100%. ИФА используется для диагностики инфекций, передающихся половым путем, ВИЧ, вирусных гепатитов A, B, C, D, E, TORCH-инфекций и множества других заболеваний.

Существует более десяти модификаций данного анализа (прямой, непрямой, неконкурентный, твердофазный и т. д.), но все они имеют особые, характерные особенности диагностики, но схожий принцип проведения. Фазы иммуноферментных серологических реакций включают в себя создание комплекса антиген-антитело, к которому добавляют ферменты, играющие роль метки. Затем исследуемый материал располагают на специальный планшет, помещают в автоматизированную систему и начинают поиск комплексов, меченых радионуклидами. Анализатор выявляет святящиеся метки, измеряет оптическую плотность и степень свечения иммунных клеток, а затем выдает результат анализа.

Как подготовиться к сдаче

Анализ не требует особой подготовки, все правила соответствуют обычной сдаче венозной крови.

От пациента требуется строго соблюдать ряд простых правил:

• за 72 часа до манипуляции следует соблюдать диету: нельзя употреблять в пищу жирное, жареное, соленое и острое, алкогольные напитки также запрещены;
• рекомендуется поддерживать оптимальный водный баланс в организме, а для этого необходимо пить не менее двух литров чистой питьевой воды;
• анализ венозной крови проводится на голодный желудок, поэтому минимум за 10 часов до манипуляции нельзя есть, пить чай, кофе и другие напитки;
• за 4 часа до процедуры запрещается курить.

Если по состоянию здоровья пациент обязан пить какие-либо таблетки, необходимо заранее предупредить об этом лечащего врача. За час до сдачи материала рекомендуется избегать физических нагрузок, а перед тем, как зайти в процедурный кабинет, следует присесть и отдохнуть 10-15 минут.

Процесс сдачи анализа

Забор венозной крови на серологическое исследование осуществляется в первой половине дня. Пациенту следует заблаговременно приехать в лабораторию, взяв с собой необходимые документы (паспорт и направление на анализ).

Пациенту предлагают пройти в процедурный кабинет и удобно расположиться на кресле. Взятие крови осуществляют из вены, которая находится в области локтевого сгиба, поэтому необходимо освободить предплечье и локтевую зону от вещей. На плечо накладывается жгут, а под руку подкладывают подушку. Медицинская сестра надевает одноразовые стерильные перчатки и обрабатывает место пункции ватным тампоном, смоченным в дезинфицирующем средстве.

Алгоритм проведения венозной инъекции включает в себя нагнетание крови в вену, для этого пациента просят несколько раз сжать и разжать кулак. Сосуд при этом лучше визуализируется и прощупывается, что облегчает забор материала. Затем медсестра вводит иглу шприца в вену, берет 10 миллилитров крови и наклеивает на место инъекции бактерицидный пластырь. Чтобы избежать образование гематомы, после манипуляции следует согнуть руку в локте на 15-20 минут.

Расшифровка результатов

Для правильной постановки диагноза серологические реакции должны расшифровываться квалифицированным специалистом. Выявление антител еще не говорит о наличии заболевания, в некоторых случаях циркуляция иммуноглобулинов в крови — это норма. Так, в нашем организме постоянно присутствуют антитела IgM от кори, ветряной оспы и т.д. Они являются маркером перенесенной инфекции и защищают нас от повторного инфицирования. Поэтому учет результатов анализа крови и расшифровка серологического исследования должны проводиться индивидуально для каждого пациента.

Однако существуют определенные серологические маркеры инфекционных заболеваний:

• Выявление в крови иммуноглобулинов класса A к вирусу или бактерии свидетельствует об остром инфекционном процессе, длящемся не более 14-ти дней.
• Если в крови найдены иммуноглобулины класса M, то требуется расширенная лабораторная диагностика, потому что эти антитела – маркер как уже перенесенной болезни, так и длительного инфицирования.
• Нарастание титра антител в 4 и более раз в двух последовательно взятых анализах крови говорит о наличии инфекционного заболевания.
• Выявление любых антигенов патогена свидетельствует о том, что возбудитель присутствует в организме.

В случае неясной диагностической картины проводятся повторные серологические тесты или обследование дополняется другими методами исследования (ПЦР, бакпосев и т.д.)

Что делать при обнаружении венерических болезней

Если серологическая диагностика подтвердила наличие ИППП, то необходимо незамедлительно переходить к этапу лечения, чтобы избежать осложнений и хронизации процесса. Пациенту следует повторно записаться на консультацию к лечащему врачу. Он назначит этиотропное комплексное лечение и будет динамически наблюдать за состоянием пациента во время медикаментозной терапии.

Тайтл: Серологические исследования: что это такое, анализ крови на определение инфекций, как сдавать и расшифровать, методики реакций для определения заболеваний

Дескрипшен: Что такое серологические исследований и для выявления каких заболеваний они используются. Как проходит анализ крови на определение инфекция. Как подготовиться, сдавать и расшифровать результат после получения. Методики проведения реакций для определения заболевания.