Среды питательные для кишечной группы

В группу БГКП входят представители нескольких родов семейства Enterobacteriaceae, в том числе Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia. Эти микроорганизмы обладают многими общими морфологическими, культуральными и биохимическими свойствами.

Бактерии группы кишечных палочек – короткие (длина 1-3 мкм, ширина 0,5-0,8 мкм) полиморфные подвижные и неподвижные грамотрицательные палочки, не образующие спор. Бактерии этой группы хорошо растут на простых питательных средах: мясопептонном бульоне (МПБ), мясопептонном агаре (МПА). На МПБ дают обильный рост при значительном помутнении среды; осадок небольшой, сероватого цвета, легкоразбивающийся. Образуют пристеночное кольцо, пленка на поверхности бульона обычно отсутствует. На МПА колонии прозрачные с серовато-голубым отливом, легко сливающиеся между собой. На среде Эндо образуют плоские красные колонии средней величины. Красные колонии могут быть с темным металлическим блеском (Е. coli) или без блеска (Е. aerogenes). Для лактозоотрицательных вариантов кишечной палочки (В. paracoli) характерны бесцветные колонии. Им свойственна широкая приспособительная изменчивость, в результате которой возникают разнообразные варианты, что усложняет их классификацию.

Большинство бактерий группы кишечных палочек (БГКП) не разжижают желатина, свертывают молоко, расщепляют пептоны с образованием аминов, аммиака, сероводорода, обладают высокой ферментативной активностью в отношении лактозы, глюкозы и других Сахаров, а также спиртов. Не обладают оксидазной активностью. По способности расщеплять лактозу при температуре 37°С БГКП делят на лактозоотрицательные и лактозоположительные кишечные палочки (ЛКП), или колиформные, которые нормируются по международным стандартам. Из группы ЛКП выделяются фекальные кишечные палочки (ФКП), способные ферментировать лактозу при температуре 44,5°С. К ним относится Е. coli, не растущая на цитратной среде.

В соответствии с ГОСТ 32901-2014 «Молоко и молочная продукция. Методы микробиологического анализа» бактерии группы кишечных палочек (БГКП, коли-формы) – это микроорганизмы семейства энтеробактерий родов эшерихия, цитробактер, энтеробактер, клебсиела, серратия; бесспоровые, грамотрицательные, аэробные и факультативно-анаэробные палочки, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа.

На этих свойствах основано определение БГКП в молочных продуктах в средах Кесслер (в соответствии с 32901-2014 по образованию газа) или Кода (по изменению цвета индикатора) после термостатирования при температуре 37±1°С в течение 24 ч, а для мороженого – 48 ч. Дифференциально- диагностическая – среда Эндо, на которой Е. coli образует красные колонии с металлическим блеском. Образование полупрозрачных бесцветных или бледно-розовых колоний говорит о принадлежности микроорганизмов к лакгозоотри- цательным, в том числе патогенным энтеробактериям.

Санитарно-показательное значение родов неодинаково: наличие эшери хий свидетельствуют о свежем фекальном загрязнении, цитробактер и энтеробактер (иногда их считают измененными эшерихиями под влиянием пребывания во внешней среде) – показатели давнего или нефекального загрязнения.

В молоке БГКП хорошо размножаются, доводя его кислотность до 50- 80°Т и образуя в нем неровный ноздреватый сгусток. Молочнокислые микроорганизмы замедляют развитие БГКП. При режимах пастеризации, принятых в молочной промышленности, БГКП гибнут. Обычные дезинфицирующие средства полностью обеззараживают оборудование, инвентарь, руки от БГКП.

Дифференциацию БГКП можно проводить с помощью специальных тестов (комплекс признаков ТИМАЦ + Л):

Т – температурный тест (тест Эйкмана, выявляет способность эшери- хий ферментировать глюкозу, лактозу, маннит с образованием газа при 44- 45°С, другие не обладают такой способностью);

И– индолообразование (способность эшерихий расщеплять аминокислоту триптофан с выделением индола);

М – реакция с метиловым красным, заключается в определении кислотообразования при ферментации глюкозы: если индикатор изменяет светло-желтый цвет на красный, это свидетельствует о снижении рН до 5 и о наличии эшерихий и цитробактер, энтеробактер не изменяет цвет индикатора;

А– реакция на ацетилметилкарбинол (ацетоин), выявляет способность микроорганизмов образовывать это вещество в среде с глюкозой; проводится качественная реакция с гидроксидом калия и креатином, дающая розовый цвет, такой способностью обладают только представители рода цитробактер;

Ц – цитратный тест (способность микроорганизмов усваивать в качестве единственного источника углерода лимонную кислоту или ее соли, используют среду Козера с цитратами, цитробактер и энтеробактер растут на таких средах, называются цитратположительными бактериями, эшерихии – нет);

Л – лактозный тест (способность ферментировать лактозу).

Основные (наиболее стабильные) тесты – температурный и цитратный.

При воздействии факторов внешней среды (например, в присутствии антибиотиков) свойства БГКП могут меняться. Для дифференциации видов дополнительно определяют уреазную активность, рост на средах с цианистым калием, ферментацию различных углеводов, используют специальные таблицы.

Критерии санитарной оценки молочных продуктов и других объектов по присутствию СПМ предусмотрены действующими ГОСТ и СанПиН. Использовавшийся ранее показатель бродильного титра заменен показателем отсутствия БГКП в определенной массе продукта. Так, например, в пастеризованном молоке БГКП должны отсутствовать в 0,01 см, в ультрапастеризованном молоке – в 10 см3, ряженке – в 1 г, в кефирной закваске – в 3 мл, в твороге – в 0,001 г.

Источник

Среду готовят двух видов: нормальную и концентрированную.

Среда нормальной концентрации: пептон—10 г; NaCl — 5 г; лактоза—5 г; вода дистиллированная — 1 дм3. После растворения указанных компонентов добавляют индиктор (2 см3 1,6% спиртового раствора бромтимолового синего или 10 см3 индикатора Андреде), устанавливают pH 7,4-7,6. Готовую среду разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками или с комочками ваты, стерилизуют в автоклаве при 112°С в течение 12 мин.

Для приготовления концентрированной среды количество всех компонентов, кроме воды, увеличивают в 10 раз.

Рецепт 45. Лактозная среда с борной кислотой для исследования воды. 10 г пептона, 12,2 г калия фосфорнокислого двузамещенного (безводного), 4,1 г калия фосфорно-кислого однозамещенного (безводного), 3,2 г борной кислоты, 5 г лактозы растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды, разливают по 5 см3 в пробирки с поплавками и стерилизуют в автоклаве при 112 °С в течение 12 мин. Срок хранения среды — не более 2 недель.

Читайте также: Кишечная грыжа у пожилых

Рецепт 46. Полужидкая среда с глюкозой. Полужидкую среду с индикатором ВР и глюкозой выпускают в сухом виде. Среду готовят по прописи на этикетке. Срок хранения готовой среды — не более 7 сут.

При отсутствии сухих сред в 1 дм3 дистиллированной воды растворяют 10г пептона, 5 г NaCl, 4-5 г агар-агара, доводят до кипения, устанавливают pH 7,2-7,4 и добавляют 1 см3 1,6% спиртового раствора бромтимолового синего. Среду стерилизуют в автоклаве при 120(±2) °С в течение 20 мин. В расплавленную стерильную среду вносят 5 г глюкозы, нагревают до кипения, разливают в стерильные пробирки столбиком высотой около 3 см и стерилизуют при 112 °С в течение 12 мин. Срок хранения среды—не более 7 сут.

Рецепт 47. Среда Кесслера. 10 г пептона, 2,5 г лактозы, 5 г сухой говяжьей желчи или 50 см3 натуральной желчи, 2 см3 водного раствора генцианвиолета, или кристаллического фиолетового, или метилового фиолетового концентрации 10 г/дм3 добавляют к 1 дм3 дистиллированной воды (если используют натуральную желчь—к 950 см3 воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения и кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,3(±0,2), разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см3 и стерилизуют в автоклаве при 115(±1)°С в течение 20 мин.

Рецепт 48. Лактозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью. 10г пептона, 5 г лактозы, 6,45 двузамещенного фосфорно-кислого безводного натрия, 2 г однозамещенного фосфорно-кислого безводного калия, 20 г сухой говяжьей желчи или 200 см3 натуральной желчи, 3 см3 водного раствора бриллиантового зеленого концентрации 5 г/дм3 добавляют к 1 дм3 дистиллированной воды (если используют натуральную желчь — к 800 см3 воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения и кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,2(±0,1), после чего среду вновь доводят до кипения.

Среда не подлежит стерилизации в автоклаве, ее разливают с соблюдением правил асептики по 10 см3 в стерильные пробирки с поплавками или по 100 см3 в колбы.

Рецепт 49. Бульон Мак-Конки. 20 г пептона, 10 г лактозы, 5 г хлористого натрия, 5 г сухой говяжьей желчи или 50 см3 натуральной желчи, 1 см3 раствора бромкрезолового пурпурного добавляют к 1 дм3 дистиллированной воды (если используют натуральную желчь—к 950 см3 воды), тщательно перемешивают, нагревают на слабом огне до кипения и кипятят 1-2 мин, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, охлаждают до 45-55 °С, устанавливают pH таким образом, чтобы после стерилизации он составлял при 25 °С 7,2(±0,1), разливают по 10 см3 в пробирки с поплавками или в колбы по 100 см3 и стерилизуют в автоклаве при 121(±1) °С в течение 15 минут.

Щелочной раствор бромкрезолового пурпурного: 1 г бромкрезолового пурпурного переносят в фарфоровую ступку с 19 см3 раствора гидроокиси натрия концентрации 0,1 моль/дм3 и после растворения добавляют 80 см3 дистиллированной воды.

Рецепт 50. Среда Кода. Среда Кода выпускается Дагестанским НПО «Питательные среды», готовится по прописи, указанной на этикетке.

Рецепт 51. Среда Хейфеца. В 1 дм3 водопроводной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 5 г маннита, устанавливают pH 7,4-7,6, нагревают до кипения, фильтруют, добавляют 1 см3 спиртового раствора 50 г/дм3 розоловой кислоты и 2,5 см3 раствора 1 г/дм3 метиленового голубого, стерилизуют однократно, нагревая 20 мин в аппарате Коха, или кипятят в колбе, закрытой ватной пробкой в течение 5 мин. Среду разливают по 7-9 см3 в пробирки. Цвет среды в пробирках должен быть краснофиолетовый.

Раствор розоловой кислоты: 0,5 г розоловой кислоты заливают 10 см3 этилового ректифицированного спирта, через 24 ч раствор готов к употреблению. Раствором можно пользоваться в течение 1 мес. с момента его приготовления.

Раствор метиленового голубого: 0,1 г метиленового голубого заливают 100 см3 дистиллированной воды, через 24 ч раствор готов к употреблению. Срок хранения раствора не ограничен.

Рецепт 52. Среда ХБ (хинозол-бромкрезол-пурпурная). В 1 дм3 водопроводной воды растворяют 10 г пептона, 5 г хлористого натрия и 5 г маннита, кипятят 15-20 мин, устанавливают pH 7,4-7,6, фильтруют через бумажный фильтр, вновь кипятят 10 мин и охлаждают до температуры 60 °С. Стерильно добавляют 30 см3 дрожжевого автолизата, 15 см3 желчи крупного рогатого скота, 10 см3 водного раствора хинозола (1:1000) и 10 см3 1,6% спиртового раствора бромкрезолового пурпурного. Среду разливают в стерильные пробирки по 7-8 см3. Цвет готовой среды — фиолетовый.

– Читать далее “Питательные среды для сальмонелл”

Редактор: Искандер Милевски. Дата публикации: 24.10.2019

Источник

Описание

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск

ИНСТРУКЦИЯ по применению набора реагентов для бактериологических исследований «Питательная среда для обнаружения бактерий группы кишечной палочки сухая» Среда Кесслера-ГРМ Оболенск

НАЗНАЧЕНИЕ

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск предназначена для обнаружения бактерий группы кишечной палочки при санитарном обследовании объектов внешней среды.

характеристика набора

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск представляет собой мелкодисперсный, гигроскопичный, светочувствительный порошок серовато-желтого цвета.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Совокупность компонентов, входящих в состав набора, обеспечивает питательные потребности для роста бактерий группы кишечной палочки и ингибиции отдельных видов микроорганизмов.

2.2. СОСТАВ набора

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

Пептон сухой ферментативный ……………………………………………….	3,0
Панкреатический гидролизат рыбной муки (ПГРМ)…………………………	7,0
a-Д-лактоза, 1-водная, …………………………………………………………………	10,0
Желчь очищенная сухая …………………………………………………………………	3,0
Кристаллический фиолетовый ………………………………………………………..	0,04
Натрий углекислый…………………………………………………………………………	0,01-0,25

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск должна обеспечивать во всех засеянных пробирках визуально обнаруживаемый рост тест-штаммов Escherichia coli 675, Klebsiella pneumoniae 418, Citrobacter freundii 101/57 в виде диффузного помутнения среды и газообразования, тест-штамма Enterobacter aerogenes 10006 — в виде диффузного помутнения среды и слабого газообразования, тест-штамма Pseudomonas aeruginosa 27/99 в виде слабого помутнения среды без газообразования через 22-24 ч инкубации при температуре (37±1) °С, а также тест-штамма E. coli 675 в виде диффузного помутнения среды и газообразования через 22-24 ч инкубации при температуре (43±1) °С при посеве по 0,5 мл микробной взвеси каждого тест-штамма из разведения 10-6:

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск должна полностью подавлять во всех засеянных пробирках рост тест-штамма Proteus vulgaris HX 19 222 при посеве по 0,5 мл микробной взвеси из разведения 10-4 и тест-штамма Staphylococcus aureus Wood-46 при посеве по 0,5 мл микробной взвеси из разведения 10-1 через 44-48 ч инкубации при температуре (37±1) °С.

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения» (Москва, 1981 г.).

ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

Термостат обеспечивающий температуру 37±1 °С
Весы лабораторные 2 класса точности
Автоклав
Пробирки стеклянные
Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл
Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл
Чашки Петри стерильные
Вода дистиллированная
Колбы
Воронки стеклянные

АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в санитарной микробиологии, научные исследования.

Проведение АНАЛИЗа

Исследования образцов проводятся по соответствующим Методическим указаниям и ГОСТам.

7.1. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Приготовление среды «Кесслера-ГРМ».

23,0 г препарата размешивают в 1 л дистиллированной воды. Кипятят 2-3 мин, фильтруют через бумажный фильтр, разливают по 5 мл в стерильные пробирки с поплавками и стерилизуют автоклавированием при температуре 112 °С в течение 20 мин.

Готовая среда имеет фиолетовый цвет. Стерильную среду можно использовать в течение 4-х недель при условии ее хранения при температуре 2-8C, в темном месте.

РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Диффузное помутнение питательной среды и газообразование в результате роста бактерий группы кишечной палочки, выделенных из исследуемых образцов, регистрируют визуально.

Для получения достоверных результатов посевы образцов производить не менее, чем в трех повторностях.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск необходимо хранить в герметично закрытой упаковке в сухом защищенном от света месте при температуре от 2 до 30 С.

Срок годности – 2 года.

Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение настоящей инструкции по применению.

По вопросам, касающимся качества «Среды Кесслера-ГРМ» в течение срока годности следует обращаться в адрес предприятия-изготовителя: 142279 Оболенск, Московская обл., Серпуховский р-н, ФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии», тел. (4967) 36-00-20, факс 36-01-16.

Скачать Инструкцию

Скачать РУ

Скачать прайс-лист

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск и другие питательные среды — лабпреп.ру

Источник

Среда Хейфеца.Выпускается в сухом виде. В состав, кроме основных питательных компонентов (вода, пептон, маннит, натрия хлорид), входят розоловая кислота, раствор метиленового синего. Готовая среда красно_фиолетового цвета, при росте кишечной палочки рН сдвигается в кислую сторону, и среда приобретает зеленоватую окраску.

ХБ.В 1000 мл воды растворяют 10 г пептона, 5 г маннита, 5 г хлорида натрия. Приготовленную смесь кипятят 15–20 мин, устанавливают рН 7,4–7,6, процеживают через бумажный фильтр, кипятят фильтрат 10 мин, охлаждают до температуры +60_С, после чего прибавляют 30 мл дрожжевого диализата, 15 мл желчи, 10 мл раствора хинозола и 10 мл 1,6%_ного спиртового раствора бромкрезола пурпурного. Среду разливают в стерильные пробирки по 7–8 мл.

Среда Кесслера.К 1000 мл дистиллированной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании в течение 20–30 мин, фильтруют через вату, добавляют 2,5 г лактозы, доводят объем дистиллированной воды до 1000 мл, устанавливают рН 7,4–7,6, добавляют 2 мл 1%_ного водного раствора генцианвиолета, разливают в пробирки с поплавками по 8–10 мл и стерилизуют при температуре +121_С в течение 10 мин. Готовая среда имеет темно-фиолетовый цвет.

Индикация сальмонелл.Навесок колбасы массой 25 г от объединенной пробы, тщательно измельченный ножницами, вносят во флакон, содержащий 100 мл среды обогащения (Мюллера, Кауфмана, хлористо-магниевой) или 225 мл селенитового бульона. Флакон встряхивают и помещают в термостат при температуре +37_С, через 24 ч петлей или пастеровской пипеткой проводят высев из среды обогащения в чашки Петри со средой Эндо, Плоскирева, Левина или ВСА. Посевы помещают в термостат при температуре +37_С на 16–24 ч. На среде Эндо, Плоскирева и Левина бактерии из рода сальмонелл образуют бесцветные колонии. На ВСА сальмонеллы образуют черные или коричневые колонии с металлическим блеском, при этом участок среды под агаром чернеет. Не менее 5 изолированных колоний, характерных для сальмонелл, пересевают на трехсахарный агар Крумвиде–Олькеницкого в модификации Ковальчука штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик и инкубируют при температуре +37_С в течение 12–16 ч.

При росте сальмонелл на трехсахарном агаре цвет скошенной поверхности среды розовый, столбик — желто-бурый. Газообразование устанавливают по наличию трещин и разрыву столбика агара, при образовании сероводорода питательная среда чернеет.

Другие грамотрицательные бактерии семейства энтеробактерий дают следующие изменения цвета трехсахарного агара:

-БГКП окрашивает среду в синий или сине-зеленый цвет с образованием газа или без него;

-палочка протея окрашивает среды в ярко-красный цвет (вследствие расщепления мочевины), в случае выделения Н2S может появиться черный осадок с возможным разрывом агара.

Для дальнейшей идентификации бактерий готовят мазки, которые окрашивают по Граму, микроскопируют, а также изучают антигенные свойства путем постановки РА на предметном стекле с поливалентной (или комплексной) сальмонеллезной агглютинирующей сывороткой. Далее проводят идентификацию с помощью монорецепторных О- и Н-агглютинирующих сальмонеллезных сывороток.

Обнаружение подвижных (кроме S. gallinarum и S. pullorum) грамотрицательных палочек, дающих характерный рост на элективных средах, не ферментирующих лактозу и сахарозу, сбраживающих глюкозу и маннит до кислоты и газа (S. typhisuis маннит не ферментирует), образующих Н2S и не образующих индол, дающих положительную реакцию агглютинации с комплексными, монорецепторными О- и Н-агглютинирующими сальмонеллезными сыворотками, указывает на выделение бактерий из рода сальмонелл.

Индикация протеяв Н_форме проводится внесением исследуемого продукта в конденсат свежескошенного МПА (метод Щукевича). Посевы помещают в термостат на 18–24 ч при температуре +37_С. При наличии в исследуемом продукте протея подвижная палочка поднимается вверх по скошенной поверхности агара, образуя вуалеобразный голубоватый налет. Культура издает характерный гнилостный запах.

Обнаружение полиморфных грамотрицательных палочек, подвижных, сбраживающих глюкозу и мочевину, не ферментирующих лактозу и маннит, указывает на наличие в продукте бактерий из рода протея.

Индикация стафилококкав исследуемом продукте основана на изучении морфологии, культуральных свойств и способности некоторых стафилококков ферментировать лецитиназу и коагулировать цитратную плазму крови кролика под воздействием фермента коагулазы.

Вначале исследуемый продукт разводят 1 : 10, вносят в МПБ, содержащий 6,5% натрия хлорида. Через сутки после инкубирования в термостате проводят пересев на молочно-солевой агар для изучения наличия пигмента и на желточно-солевой агар для выявления лецитиназной активности.

Посевы выдерживают 24 ч в термостате и сутки при комнатной температуре, затем учитывают результат: на поверхности питательной среды стафилококки образуют слегка выпуклые круглые колонии с ровными краями, т. е. S-формы; на желточно-солевом агаре вокруг колоний стафилококков появляется «радужный венчик», что является одним из признаков их патогенности (лецитовителазная активность).

Не менее чем из 5 типичных колоний готовят препараты, которые окрашивают по Граму и микроскопируют. При наличии стафилококков обнаруживают грамположительные кокки, располагающиеся в виде беспорядочных кучек и гроздьев винограда. Для подтверждения патогенности выделенных стафилококков ставят реакцию плазмокоагуляции по следующей методике: в пробирку с 0,5 мл цитратной плазмы крови кролика, разведенной физраствором (1 : 5), вносят петлю чистой суточной культуры стафилококка и помещают в термостат при температуре +37_С. Реакцию плазмокоагуляции предварительно учитывают через 3–4 ч (осторожно наклоняя, не встряхивая пробирку). В сомнительных случаях пробирки оставляют в термостате для окончательного учета через 24 ч. Реакцию считают положительной, если плазма коагулирует в сгусток (реакцию подвижная палочка поднимается вверх по скошенной поверхности агара, образуя вуалеобразный голубоватый налет. Культура издает характерный гнилостный запах.

Для подтверждения патогенности выделенных стафилококков ставят реакцию плазмокоагуляции по следующей методике: в пробирку с 0,5 мл цитратной плазмы крови кролика, разведенной физраствором (1 : 5), вносят петлю чистой суточной культуры стафилококка и помещают в термостат при температуре +37_С. Реакцию плазмокоагуляции предварительно учитывают через 3–4 ч (осторожно наклоняя, не встряхивая пробирку). В сомнительных случаях пробирки оставляют в термостате для окончательного учета через 24 ч. Реакцию считают положительной, если плазма коагулирует в сгусток (реакцию оценивают по степени плотности сгустка от одного до четырех плюсов).

Индикация сульфитредуцирующих клостридий (СРК)в колбасе основана на учете специфического роста клостридий в железосульфитсодержащих средах. При взаимодействии натрия сульфита с хлоридом железа образуется сульфат железа, который вызывает почернение питательной среды.

Для выявления СРК 1 мл исследуемой взвеси стерильной пипеткой вносят в пробирку с 9 мл жидкой сульфит-циклосериновой среды или среды Вильсон–Блера. Затем проводят последовательные пересевы на аналогичные объемы среды и получают возрастающие 10_кратные разведения суспензии. Посевы выдерживают 18–20 ч при температуре +37_С, при наличии СРК среда чернеет.

Для подтверждения принадлежности выделенных культур к клостридиям проводят пересев на поверхность агаризованной плотной среды Вильсон–Блера и инкубируют в анаэробных условиях при температуре +37_С в течение 24–48 ч. Отбирают типичные колонии и изучают микроорганизмы по морфологическим и некоторым культурально-ферментативным свойствам, в частности, по отрицательной реакции на каталазу.

Если в посевах (в 4 колониях из 5) обнаружены СРК, спорообразующие палочки, грамположительные, каталаза-отрицательные, способные расти в анаэробных условиях, то делают заключение о наличии в продукте СРК по максимальному разведению суспензии, в посеве которого наблюдается почернение среды. Например, если характерные изменения наблюдаются в пробирках с разведением 10–1, то считают, что в 1 г исследуемого продукта содержится 10 клеток, при аналогичных изменениях в пробирках с разведением 10–2 — 100 клеток.

При получении неудовлетворительных результатов микробиологического анализа готовой продукции по требованию контролирующих организаций проводят исследование вспомогательных материалов при постоянном входном контроле.

Источник

Среды питательные для кишечной группы

Описание

НАЗНАЧЕНИЕ

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Среда Кесслера-ГРМ Оболенск и другие питательные среды — лабпреп.ру