Техника посева при кишечных инфекциях

Проведение забора материала от больных для бактериологических исследований

Правила:

1. Вид материала определяется клинической картиной заболевания, т.е. он должен соответствовать локализации предполагаемого возбудителя с учетом патогенеза болезни. Например, забираем гнойное содержимое ран, фурункулов, карбункулов, мокроту при бронхо-легочных заболеваниях4; испражнения при заболеваниях ЖКТ; кровь при лихорадочных состояниях и т.д.

2. Материал следует брать до применения антибиотиков или других химиотерапевтических препаратах или через определенный промежуток времени после их назначения, необходимый для выведения препарата из организма (например, антибиотики выводятся из организма через 8-10 часов)

3. Материал необходимо брать в достаточном количестве для исследования, соблюдая правила асептики в процедурном кабинете, в перевязочной или операционной, что бы не загрязнить его микроорганизмами окружающей среды и представителями нормальной микрофлоры человека.

4. Забор материала осуществляют, по возможности, в начальном периоде болезни, т.к. именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше и они имеют более типичную локализацию. Ранний этиологический диагноз предполагает более ранее, следовательно, более эффективное лечение и профилактику.

5. Исследуемый материал в возможно короткие сроки (1-2 часа) следует доставить в лабораторию. Его доставка должна осуществляться средним медицинским персоналом и производиться в лабораторной посуде или специальных контейнерах при сохранении первоначальной температуры материала, или при охлаждении, замораживании сухим льдом (зависимости от характера материала). Любой материал, направляемый в лабораторию, должен сопровождаться соответствующим направлением, в котором указывается фамилия, имя и отчество больного, вид материала, дата и время его взятия, предварительный диагноз заболевания, название учреждения или отделения, подпись врача, направляющего материал на исследование.

6. Любой клинический материал должен рассматриваться как потенциально опасный для человека. Поэтому при его заборе, хранении, доставке, обработке во избежание заражения должны соблюдаться такие же меры техники безопасности, как в бактериологической лаборатории.

7. После исследования остатки материала подлежат уничтожению (автоклавированию или сжиганию), а посуда, контейнеры, инструменты – обеззараживанию.

Правила забора и посева крови на стерильность и гемокультуру

Производится при тифо-паратифозных заболеваниях, сепсисе, менингококковой инфекции или других инфекциях, сопровождающихся лихорадкой, причем на протяжении всего лихорадочного периода болезни, но лучше в начальном периоде или в разгаре болезни (при выраженной бактериемии). Для исследования берут кровь из вены локтевого сгиба, у маленьких детей кровь берут в меньшем количестве из мочки уха, пятки, пальца. Пробы крови отбирают после тщательной обработки кожи с соблюдением правил асептики, одноразовым стерильным шприцем. Посев на питательные среды стерильного материала (кровь или другие, содержащие микробов жидкости у здоровых лиц) также лучше делать у постели больного, либо помещать в стерильную посуду, содержащую вещества, препятствующие свертыванию крови 0,3% раствора цитрата натрия, 0,1% раствор оксалата натрия). Обычно берут 5-10мл крови и засевают во флакон, содержащий 50-100 мл среды. Для этого используют для флакона с питательной средой (один для аэробов, другой для анаэробов). Посев крови производится на жидкие питательные среды – 10% желчный бульон, 1% сахарный бульон, двухфазную среду, а также жидкие и полужидкие среды для культивирования анаэробов в разведении 1:10. Флаконы с питательной средой получают в лаборатории, переливание крови из шприца во флакон необходимо производить над пламенем спиртовки, предварительно сняв иглу. Флакон с посевом направляется в лабораторию, а в вечернее и ночное время помещают в термостат. Студенту важно помнить, что тем раньше от начала заболевания производится посев. Тем больше шансов получить положительный результат. И, наоборот, чем позже взята кровь, тем меньшее количество возбудителя в ней находится и положительные результаты получаются реже. А при нормальной температуре – совсем редко. Следует знать, что для повышения числа положительных результатов гемокультуры рекомендуется, при отсутствии противопоказаний, за 15-20 минут для взятия крови ввести подкожно 1мл 0,1% раствора адреналина, что способствует сокращению селезенки и выходу в кровяное русло возбудителей (например, при тифозно-паратифозных заболеваниях)

Предварительный результат посева при тифо-паратифозных заболеваниях получают через 2-3 дня, а окончательный – через 7-10 дней. Следует помнить, что увеличение кратности посевов крови (три дня подряд на подъеме температуры) значительно повышают частоту выделения микробов из крови. У леченных больных кровь для посева следует брать 5-6 раз.

Правила забора и посева испражнений

Производится при кишечных инфекциях (брюшной тиф, паратифы, шигеллезы, сальмонеллезы и т.д.), а так же при всех болезнях, протекающих с поражением ЖКТ и сопровождающихся расстройством стула. Сбор испражнений производится стерильным деревянным шпателем или стеклянной палочкой в количестве 2-3г в стерильные баносчеи из судна, горшка или лотка, а так же непосредственно из прямой кишки с помощью тампонов, металлических петель или трубки ректоскопа. Студенты должны помнить, что даже остаточное количество дезинфицирующих средств на стенках судна или горшка способно значительно изменить как количественный, так и качественный состав микробов в клиническом материале, поэтому их следует тщательно промывать горячей водой. Следует брать слизь, гной, фибринные пленки и избегать примеси крови. При невозможности своевременного посева кала используют консервант – глицериновую смесь, составляющую 23 общего объема. Необходимо помнить, что посев испражнений производят прямым способом на чашки Петри со средой Плоскирева, Левина, Эндо, висмут-сульфит агаром или на среды обогащения (селенитовая, среда Мюллера), с последующим пересевом на перечисленные выше среды для выделения энтеробактерий, на щелочной агар (1% пептонную воду с последующим пересевом на щелочной агар) – для вибрионов, МПА – для бацилл, МПА с фурагином – для выделения псевдомонад, ЖСА – для выделения стафилококков, среду Китта-Тароцци – для клостридий.

Студенты должны знать, что при брюшном тифе посевы кала следует проводить со второй недели заболевания, перед выпиской из стационара, а пищевикам и им приравненным лицам – на протяжении всего периода работа в декретированных учреждениях. Положительные результаты копрокультуры при тифо-паратифозных заболеваниях бывают на 2-3 неделе заболевания и реже – в первые дни болезни, а рри других заболеваниях – на 2-3 день после посева.

Правила забора мочи

Производится при воспалительных заболеваниях мочевыводящих путей. Для бактериологического исследования следует брать среднюю порцию утренней мочи после тщательного туалета мочеполовых органов кипяченой водой с мылом. Мочу собирают в стерильную посуду, на исследование отбирают 3-5мл в стерильной, плотно закрывающийся флакон и доставляют в лаборатории. В течение 1 часа. При затрудненном мочеиспускании возможен отбор мочи с помощью катетера. При бактериологическом исследовании определяют степень бактериурии, т.е. количество колониеобразующих единиц в 1мл мочи, методом секреторных посевов мочи. Для этого чашку Петри с питательной средой 3-5% кровяным агаром необходимо разделить на 4 сектора. Бактериологической петлей диаметром 2мм (вместимость 0,005мл) производят посев мочи (30-40 штрихов) на сектор а чашки Петри, после этого петлю прожигают и производят 4 штриховых посева из сектора А в сектор ! и аналогичным образом – из 1 во 2, из 2 в 3.

Наносят по капле мочи на чашки Петри со средами Эндо (для энтеробактерий) и Сарубо (для грибов), а затем засевают штрихом по всей поверхности чашек. По капле материала (0,05мл) засевают в селенитовую среду и сахарный бульон в соотношении 1:9, все чашки и пробирки инкубируют 18-24 часа при 35-37 градусах. После инкубации число выросших колоний на разных секторах подсчитывают и определяют степень бактериурии по таблице.

Наличие в 1 мл мочи у детей 104, а у взрослых 105 микроорганизмов и более, говорит о наличии инфекции в мочевыводящих путях или почках. После подсчета микролных клеток в 1мл мочи проводят выделение чистой культуры микробов для дальнейшей идентификации и определения чувствительности к атибиотикам. Окончательный результат исследования выдается на 4-5 сутки.

Правила забора желчи

Производится при воспалительных заболеваниях желчевыводящих путец. Желчь забирается во время дуоденального зондирования. В отдельные стерильные пробирки собирают все три порции желчи (А, В и С) с количестве 10-20мл и не ранее 8-10 дня нормальной температуры. Конец зонда предварительно обрабатывают спиртом, затем, после выделения 1-2мл желчи, которые не используют для исследования, наполняют пробирки через зонд с помощью стерильного шприца.

При тифо-паратифозных заболеваниях студент должен знать, что положительная биликультура может быть в течение всего заболевания, а так же в периоде реконвалесценции. При этом возбудитель в желчи обнаруживается в ,15 чаще, чем в корпо- и уринокультурах. Однако, из-за опасности дуоденального зондирования в лихорадочном периоде, посев желчи производится только у реконвалесцентов и бактерионосителей. Для посева желчи используют жидкие среды обогащения (селенитовая, Мюллера и т.д.) и плотные дифференциально-диагностические (Плоскирева, висмут-сульфит агар). Материал в количестве 1-2мл вносят в жидкую среду, а 0,5мл наносят на поверхность на поверхность плотной среды, затем равномерно распределяют шпателем.

При воспалительных процессах в желчном пузыре иной этиологической природы необходимо посев материала проводить как при посеве мочи. Учет результатов исследования и выписка производится на 4-5 сутки.