Набор ифа на вирусную диарею

Подготовка исследуемого материала

Для обнаружения антигена вируса диареи в качестве испытуемого материала используют слизистую носовой перегородки, миндалины, трахею, пораженные (изъязвления, воспаления) участки слизистой оболочки носа, носовой перегородки, фрагменты тонкого и толстого кишечника погибших телят. От больных в острой стадии заболевания животных берут пробы носовой слизи при ринитах и фекалий при поносах.

Для получения 25-50%-ой суспензии кусочки материала тщательно измельчают ножницами и растирают в фарфоровой ступке до образования однородной кашицеобразной массы, вносят физиологический раствор. Полученную суспензию промораживают в течение 18-20 ч при минус 20°С, оттаивают и осветляют центрифугированием при 4000 об./мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную посуду и используют для исследования.

Подготовка компонентов набора для постановки реакции

Для постановки ИФА необходимы одно- и многоканальные автоматические микропипетки разных объемов со сменными наконечниками, мерная лабораторная посуда, дистиллированная вода.

Растворение компонентов реакции проводят на 0.01 М калий-фосфатном буфере (рН 7.2-7.4), для приготовления которого содержимое флаконов № 7 (0.01 М калий фосфатный буфер) и №8 (натрий хлористый) растворяют в 2 дм3 дистиллированной воды и полученный фосфатно-буферный раствор (ФБР) хранят при 4-8°С в течение месяца при
необходимости.

Содержимое ампул со специфическим диарейным (№1) и отрицательным (№2) антигенами растворяют в 0.2 см3 ФБР каждую.

Для промывания планшетов и разведения компонентов при постановке реакции готовят содержащий твин фосфатно-буферный раствор (ТФБР): к 2 дм3 ФБР добавляют 1.0 см3 твин-20 или твин-80 (флакон №6) и перемешивают до полного растворения.

Содержимое ампул с иммуноферментным антидиарейным коньюгатом (№3) растворяют в 10 см3 ТФБР.

Субстратную смесь готовят непосредственно перед использованием в реакции следующим образом: содержимое ампулы с 5-аминосалициловой кислотой (№4) растворяют в 10 см3 подогретой до 30-40°С дистиллированной воды, охлаждают и вносят в полученный раствор содержимое ампулы с гидроперитом (№5).

Постановка реакции

На первом этапе реакции во все лунки планшета вносят по 0.1 см3 ТФБР. В первую лунку 1-го ряда плашки вносят 0.1 см3 специфического антигена, в первую лунку 2-го ряда – 0.1 см3 отрицательного антигена, а в первые лунки последующих рядов вносят по 0.1 см3 исследуемых антигенов и готовят их двукратные разведения, начиная с 1:2 до 1:128 на ТФБР.При качественной реакции (ответ “есть” или “нет”) постановку осуществляют аналогично, но материал не титруют, а делают не менее трех повторов с разведением испытуемой пробы 1:2. Содержимое лунок тщательно перемешивают пипетированием в течение 5-7 сек, инкубируют 1.5-2 ч при 36.5-37.5°С и 3-4 раза отмывают ТФБР лунки плашки от несвязавшихся антигенов.

Содержимое ампулы с иммуноферментным коньюгатом вносят по 0.1 см3 во все отмытые лунки плашек, инкубируют при 36.5-37.5°С 1.5 ч и вновь четырежды отмывают раствором ТФБР.

Затем во все лунки вносят по 0.1 см3 субстратной смеси, которую готовят непосредственно перед использованием в реакции.

Учет результатов

Результаты реакции учитывают через 40-60 мин, проводя измерения оптической плотности (О.П.) раствора в каждой лунке на спектрофотометре (ридере) с вертикальным лучом света при длине волны 405 нм.

На первом этапе вычисляют показатель О.П. каждой испытуемой и контрольной пробы.

Результаты считают достоверными, если О.П. положительного контроля ≥0.4, а О.П. отрицательного контроля ≤ 0.2.

Реакцию оценивают по отношению значения О.П. испытуемой пробы (S) к значению О.П. положительного контроля (Р) по формуле:

S/P = О.П. испытуемой пробы×100/О.П. положительного контроля

Пробу считают положительной, если значение S/P > 48%; если значение S/P < 48% – проба считается отрицательной.

При отсутствии ридера проводят визуальный учет результатов реакции через 40-60 мин по появлению окраски образовавшегося реакционного продукта по сравнению с контролями от коричневого до светло-коричневого цвета:

— интенсивное коричневое окрашивание, коричневое окрашивание – положительный результат;

— светло-коричневое окрашивание – сомнительный результат;

— окрашивание отсутствует или находится на уровне отрицательного контроля – отрицательный результат.

Источник

ÈÔÀ äèàãíîñòèêà âèðóñíîé äèàðåè

ÈÔÀ Â ÄÈÀÃÍÎÑÒÈÊÅ ÂÈÐÓÑÍÎÉ ÄÈÀÐÅÈ

È.Í.ÌÀÒÂÅÅÂÀ ÂÍÈÒÈÁÏ

æóðíàë “Âåòåðèíàðèÿ” ¹6 2007

Ìåòîä îïðåäåëåíèÿ àíòèãåíîâ è àíòèòåë ñ ïîìîùüþ èììóíîôåðìåíòíîãî àíàëèçà (ÈÔÀ) ïðè îïòèìàëüíîì ñîîòíîøåíèè ñåáåñòîèìîñòè è ÷óâñòâèòåëüíîñòè – äåéñòâåííûé èíñòðóìåíò â âåòåðèíàðíîé ëàáîðàòîðíîé ïðàêòèêå.

ÈÔÀ ìîæíî èñïîëüçîâàòü äëÿ âûÿâëåíèÿ ïðàêòè÷åñêè ëþáîé èììóíîðåàêòèâíîé ìîëåêóëû. Ïðåèìóùåñòâà åãî â òîì, ÷òî îí íå çàâèñèò îò êëåòî÷íûõ êóëüòóð, ïðèìåíèì äëÿ ìàññîâîãî ñêðèíèíãà, ðåçóëüòàòû ìîæíî ïîëó÷èòü â òå÷åíèå íåñêîëüêèõ ÷àñîâ. Ñðåäè ðàçíîîáðàçíûõ âàðèàíòîâ äàííîãî ñïîñîáà ÷àñòî ïðèìåíÿþò íåïðÿìîé ìåòîä ÈÔÀ, ãäå àíòèãåí âîçáóäèòåëÿ âèðóñíîé äèàðåè – áîëåçíè ñëèçèñòûõ îáîëî÷åê (ÂÄ-ÁÑ) ìîáèëèçóåòñÿ íà ïîëèñòèðîëîâîì íîñèòåëå è âçàèìîäåéñòâóåò ñî ñïåöèôè÷åñêèìè àíòèòåëàìè, êîòîðûå
çàòåì âûÿâëÿþò ñ ïîìîùüþ êîíúþãèðîâàííûõ ñ ôåðìåíòîì àíòèãëîáóëèíîâ è õðîìîãåííîãî ñóáñòðàòà. Ñïåöèôè÷íîñòü ýòîé òåñò-ñèñòåìû îïðåäåëÿåòñÿ âûáîðîì àíòèãåíà, êîòîðûé ìîæåò áûòü î÷èùåííûì âèðóñîì [4, 6], äåòåðãèðîâàííûì ýêñòðàêòîì êóëüòóðû êëåòîê, èíôèöèðîâàííîé âèðóñîì ÂÄ-ÁÑ ÊÐÑ [1, 8], ëèáî ðåêîìáèíàíòíûìè âèðóñíûìè ïðîòåèíàìè, ïðîäóöèðîâàííûìè â áàêòåðèàëüíûõ êëåòêàõ [9]. Äðóãîé ðàñïðîñòðàíåííûé âàðèàíò -êîíêóðåíòíûé ÈÔÀ, ãäå âèðóññïåöèôè÷åñêèå àíòèòåëà â èññëåäóåìîé ñûâîðîòêå êîíêóðèðóþò èëè áëîêèðóþò êîíúþãèðîâàííûå
âèðóññïåöèôè÷åñêèå àíòèòåëà, ÷òî ïðèâîäèò ê ñíèæåíèþ èíòåíñèâíîñòè îêðàøèâàíèÿ ïîëîæèòåëüíîãî îáðàçöà [12]. Ðàçðàáîòàíî çíà÷èòåëüíîå êîëè÷åñòâî âàðèàíòîâ ÈÔÀ äëÿ âûÿâëåíèÿ àíòèãåíîâ âèðóñà ÂÄ-ÁÑ ÊÐÑ ñ ïðèìåíåíèåì âûñîêîñïåöèôè÷íûõ ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë (ÌÊÀÙ13, 14, 16].

Читайте также:  Температура диарея тошнота симптомы чего

Äëÿ îïðåäåëåíèÿ ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë ê âèðóñó ÂÄ-ÁÑ ÊÐÑ â ñûâîðîòêå è ïëàçìå êðîâè, ïðîáàõ ìîëîêà J.I. Kramps et al. (1999) ðàçðàáîòàëè áëîêèðóþùèé âàðèàíò ÈÔÀ (“Ceditest”) ñ èñïîëüçîâàíèåì 2 ìîíîêëîíàëüíûõ àíòèòåë, íàïðàâëåííûõ ïðîòèâ âûñîêîêîíñåðâàòèâíîãî ýïèòîïà íåñòðóêòóðíîãî ïðîòåèíà NS3.

Ñïåöèôè÷åñêèå àíòèòåëà ê âèðóñó ÂÄ-ÁÑ ÊÐÑ êëàññèôèöèðóþò íà 2 ãðóïïû: ïåðâàÿ -àíòèòåëà ê âèðóñíûì ãëèêîïðîòåèíàì, ãëàâíûì îáðàçîì Å2 èëè äð 53, êîòîðûå áëîêèðóþò èíôåêöèîííîñòü è íåéòðàëèçóþò âèðóñ ÂÄ-ÁÑ.

Îíè ïåðåêðåñòíî ðåàãèðóþò ñî ìíîãèìè øòàììàìè ÂÄ-ÁÑ ÊÐÑ [5]; âòîðàÿ – àíòèòåëà ê èììóíîãåííîìó íåñòðóêòóðíîìó âèðóñíîìó ïðîòåèíó NS 2 – 3 (ð125) – î÷åíü âàæíîìó äëÿ âíóòðèêëåòî÷íîé ðåïëèêàöèè âèðóñà. Àíòèòåëà ê íåìó íå íåéòðàëèçóþò âèðóñ, íî èõ ìîæíî îïðåäåëèòü ðàçíûìè ñåðîëîãè÷åñêèìè òåñòàìè ( V. Moenning, 1991).

Èñïîëüçîâàíèå ÈÔÀ äëÿ èññëåäîâàíèÿ ñáîðíûõ ïðîá ìîëîêà ïîçâîëÿåò çíà÷èòåëüíî ñíèçèòü çàòðàòû íà ïðîâåäåíèå îçäîðîâèòåëüíûõ ìåðîïðèÿòèé. Êîíòðîëü ïðîòèâîâèðóñíûõ àíòèòåë â ñáîðíûõ ïðîáàõ ìîëîêà êîðîâ, íåâàêöèíèðîâàííûõ ïðîòèâ ÂÄ-ÁÑ, äàåò èíôîðìàöèþ îá èíôèöèðîâàííîå™ âèðóñîì ÂÄ-ÁÑ ñòàäà è ïðèñóòñòâèè â íåì ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûõ æèâîòíûõ (R. Niskanen, 1989, 1993; S. Alenius et al., 1997; V. Bitsch et al.,1997;S. Waageetal., 1997; J. Kramps, 1999). Äàííûé òåñò óäîáåí ïðè äëèòåëüíîì
íàáëþäåíèè ýà áëàãîïîëó÷íûìè ñòàäàìè, íàõîäÿùèìèñÿ â àðåàëå èíôåêöèè, à ïîÿâëåíèå â íèõ ñåðî-ïîçèòèâíûõ êîðîâ ïîçâîëÿåò ïðèíèìàòü ñðî÷íûå ìåðû ïî ëèêâèäàöèè èíôåêöèè.

Òåõíèêà àìïëèôèêàöèè in vitro òàêæå ìîæåò áûòü èñïîëüçîâàíà äëÿ äåòåêöèè âèðóñíîé íóêëåèíîâîé êèñëîòû â ïðîáàõ ìîëîêà (G. Radwan, 1995; T.W. Drew, 1999). Äàííûé òåñò ïðèãîäåí äëÿ ïîèñêà â ñòàäàõ ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûõ æèâîòíûõ, âàêöèíèðîâàííûõ ïðîòèâ ÂÄ-ÁÑ ÊÐÑ, îäíàêî íå âñå îíè â ìîìåíò ïðîâåäåíèÿ èññëåäîâàíèÿ ëàêòèðóþò, ïîýòîìó ìåòîä èìååò òîëüêî âñïîìîãàòåëüíîå ýïèäåìèîëîãè÷åñêîå çíà÷åíèå.

Äèàãíîç íà ïåðñèñòåíòíóþ èíôåêöèþ âèðóñîì ÂÄ-ÁÑ ÊÐÑ ñ÷èòàþò ïîäòâåðæäåííûì ïðè ïîâòîðíîì âûäåëåíèè âèðóñà â îáðàçöàõ áåç ñåðîêîíâåðñèè ÷åðåç 3-4 íåä. Ó æèâîòíûõ ñ îñòðîé èíôåêöèåé ÂÄ-ÁÑ òèòð âèðóñà â êðîâè áûë îáû÷íî íèçêèé è ðåãèñòðèðîâàëè åãî íåïðîäîëæèòåëüíîå âðåìÿ. Àíòèòåëà â ñûâîðîòêå êðîâè æèâîòíûõ, ïåðåíåñøèõ îñòðóþ èíôåêöèþ ÂÄ-ÁÑ, îïðåäåëÿëè â òå÷åíèå ãîäà [8].

Ðåçóëüòàòû ñåðîëîãè÷åñêîãî ìîíèòîðèíãà, ïðîâåäåííîãî ìåòîäîì ÈÔÀ ó ðàçíûõ âîçðàñòíûõ ãðóïï æèâîòíûõ, äàþò èíôîðìàöèþ îá èíôèöèðîâàííîñòè ñòàäà. Êîñâåííûì ïîäòâåðæäåíèåì ïåðñèñòåíòíîé èíôåêöèè ó æèâîòíîãî ìîæåò ñëóæèòü îòñóòñòâèå àíòèòåë ïðîòèâ âèðóñà ÂÄ ÊÐÑ ïðè âûñîêèõ òèòðàõ àíòèòåë ó æèâîòíûõ, êîíòàêòèðóþùèõ ñ äàííûì èíäèâèäóìîì. Åñëè ïðè ïðîâåðêå ñûâîðîòêè êðîâè, âçÿòîé ÷åðåç 3-4 íåä, îáíàðóæèëè âûñîêèé òèòð àíòèòåë, òî ýòî ñâèäåòåëüñòâóåò î ïèêîâîé ôàçå èíôåêöèè.

Âûäåëÿþò 5 ôàç â èíôåêöèîííîì öèêëå ðàçâèòèÿ áîëåçíè (ñì. òàáëèöó). Êîíòðîëèðóÿ òèòðû àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè ìîëîäûõ

Õàðàêòåðèñòèêà ôàç èíôåêöèîííîãî öèêëà ðàçâèòèÿ ÂÄ-ÁÑ êðóïíîãî ðîãàòîãî ñêîòà

Ôàçà        Êðàòêàÿ õàðàêòåðèñòèêà

À    Íåäàâíî èíôèöèðîâàííîå ñòàäî áåç ïðèñóòñòâèÿ ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûõ æèâîòíûõ, òîëüêî íåçíà÷èòåëüíûé ïðîöåíò îñîáåé ìîæåò áûòü ñåðîïîçèòèâåí

     Èíôèöèðîâàííîå ñòàäî ñ ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûìè òåëÿòàìè ìîëîæå 3-4-ìåñÿ÷íîãî âîçðàñòà, ìíîãèå æèâîòíûå ïåðåíîñÿò îñòðóþ èíôåêöèþ

Ñ    Èíôèöèðîâàííîå ñòàäî ñ ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûìè òåëÿòàìè ñòàðøå 3-4-ìåñÿ÷íîãî âîçðàñòà, áîëåå ÷åì 90 % æèâîòíûõ ñåðîïîçèòèâíû

Ä    Ðàíåå èíôèöèðîâàííîå âèðóñîì ñòàäî, íî ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûå æèâîòíûå ê ýòîìó âðåìåíè óæå ìîãóò áûòü óäàëåíû èç ñòàäà. Ìîëîäûå æèâîòíûå íå èìåþò àíòèòåë ê âèðóñó ÂÄ-ÁÑ, òàê êàê äî 6-8-ìåñÿ÷íîãî âîçðàñòà îñâîáîæäàþòñÿ îò êîëîñòðàïüíûõ àíòèòåë ê âèðóñó. Âçðîñëûå êîðîâû îñòàþòñÿ ñåðîïîçèòèâíûìè

Å     Ðàíåå èíôèöèðîâàííîå ñòàäî, åñëè ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûå æèâîòíûå óäàëåíû íåñêîëüêî ëåò íàçàä. Âñå ìîëîäûå æèâîòíûå (êðîìå òåëÿò ñ êîëîñòðàëüíûìè àíòèòåëàìè ê äàííîìó âèðóñó), è ìíîãèå ìîëîäûå êîðîâû íå èìåþò ïðîòèâîâèðóñíûõ àíòèòåë æèâîòíûõ ìåòîäîì ÈÔÀ, ìîæíî ïðîãíîçèðîâàòü ïðèñóòñòâèå èëè îòñóòñòâèå ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûõ âèðóñîì ÂÄ-ÁÑ æèâîòíûõ. Äëÿ ôàç Ñ, Ä è Å èíôåêöèîííîãî öèêëà ðàçâèòèÿ áîëåçíè õàðàêòåðíî, ÷òî áîëüøèíñòâî ïðîá ñûâîðîòêè êðîâè
ñåðîïîçèòèâíû èëè ñåðîíåãàòèâíû, à äëÿ ôàç À è  – î÷åíü íåçíà÷èòåëüíîå èõ êîëè÷åñòâî ñåðîïîçèòèâíû [7].

Ò. Sandvik (1999) ïîñëå òåñòèðîâàíèÿ ñûâîðîòêè êðîâè íåâàêöèíèðîâàííûõ æèâîòíûõ â ÈÔÀ íà íàëè÷èå àíòèòåë è àíòèãåíîâ âèðóñà ÂÄ-ÁÑ, ðàñïðåäåëÿë èõ íà ñëåäóþùèå êàòåãîðèè: êëèíè÷åñêè çäîðîâûå ïåðñèñòåíòíî èíôèöèðîâàííûå (ñòàðøå 2-ìåñÿ÷íîãî âîçðàñòà áûëè âñåãäà ñåðîíåãàòèâíû è èìåëè ïîñòîÿííî âûñîêèé óðîâåíü âèðóñà â êðîâè, ñëþíå, ôåêàëèÿõ, ìî÷å); æèâîòíûå ñ îñòðîé èíôåêöèåé (íåïðîäîëæèòåëüíîå âðåìÿ èìåëè íèçêèé òèòð âèðóñà ÂÄ-ÁÑ â êðîâè) è ò. ï.

Читайте также:  Китайские препараты от диареи

Çàêëþ÷åíèå. Ñåðîëîãè÷åñêèå èññëåäîâàíèÿ ñûâîðîòîê êðîâè, ìîëîêà èëè ìîëîçèâà æèâîòíûõ ìåòîäîì ÈÔÀ ïîçâîëÿþò áîëåå ðàöèîíàëüíî è íàäåæíî îðãàíèçîâàòü ðàáîòó ïî ïðîôèëàêòèêå è îçäîðîâëåíèþ ñòàä îò äàííîé èíôåêöèè. Õîòÿ äëÿ ïîäòâåðæäåíèÿ äèàãíîçà íà ÂÄ-ÁÑ òðåáóþòñÿ: èçîëÿöèÿ âèðóñà â êóëüòóðå êëåòîê, ìåòîä ÏÖÐ äëÿ âûÿâëåíèÿ ãåíîìà âèðóñà â áèîëîãè÷åñêèõ æèäêîñòÿõ è ò.ä.

æóðíàë “Âåòåðèíàðèÿ” ¹6 2007

Ðåêëàìà íà ñàéòå

Источник

Подготовка исследуемого материала

Для обнаружения антигена вируса диареи в качестве испытуемого материала используют слизистую носовой перегородки, миндалины, трахею, пораженные (изъязвления, воспаления) участки слизистой оболочки носа, носовой перегородки, фрагменты тонкого и толстого кишечника. От больных в острой стадии заболевания животных берут пробы носовой слизи при ринитах и фекалий при поносах.

Для обнаружения рота- и коронавирусных антигенов в качестве испытуемого материала используют фекалии, фрагменты тонкого и толстого кишечника.

Для получения 25-50% суспензии кусочки материала тщательно измельчают ножницами и растирают в фарфоровой ступке до образования однородной кашицеобразной массы. Вносят физиологический раствор. Полученную суспензию промораживают в течение 18-20 ч при – 20°С, оттаивают и осветляют центрифугированием при 4000 об./мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают в стерильную посуду, инкубируют при 4°С в течение 2-3 ч и используют для исследования.

Для постановки ИФА необходимы одно- и многоканальные автоматические микропипетки разных объемов со сменными наконечниками, мерная лабораторная посуда, дистиллированная вода.

Подготовка компонентов набора для постановки реакции

Растворение компонентов реакции проводят на 0.01 М калий-фосфатном буфере (рН 7.2-7.4), для приготовления которого содержимое флаконов №11 (0.01 М калий фосфатный буфер) и №12 (натрий хлористый) растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды и полученный фосфатно-буферный раствор (ФБР) хранят при 4-8 °С в течение месяца.

Содержимое ампул со специфическими (ротавирусным, коронавирусным, диарейным) антигенами растворяют в 0.1 см3 ФБР каждую, а с отрицательным – в 0.3 см3 ФБР.

Для промывания планшетов и разведения компонентов при постановке реакции готовят ТФБР: к 1 дм3 ФБР добавляют 0.5 см3твин-20 или твин-80 (флакон №10) и перемешивают до полного растворения.

Содержимое ампул с иммуноферментными (ротавирусным, диарейным, коронавирусным) коньюгатами растворяют в 5 см3 ТФБР каждую.

Субстратную смесь готовят непосредственно перед использованием в реакции следующим образом: содержимое ампулы с 5-аминосалициловой кислотой (№8) растворяют в 10 см3 подогретой до 30-40°С дистиллированной воды, охлаждают и вносят в полученный раствор содержимое ампулы с гидроперитом (№ 9).

Постановка реакции

Реакцию проводят на планшете, сенсибилизированном иммуноглобулинами:

1-4 ряд – ротавирусные иммуноглобулины;

5-8 ряд – диарейные иммуноглобулины;

9-12 ряд – коронавирусные иммуноглобулины

На первом этапе реакции во все лунки планшета вносят по 0.1 см3ТФБР. При качественной реакции (ответ “да” или “нет”) в первые лунки 1-го,5-го и 9-го рядов вносят по 0.1 см3 испытуемой пробы, пипетируют и 0.1 см3 раствора удаляют. В одну из лунок 4-го ряда таким же образом вносят ротавирусный антиген, в лунку 8-го ряда диарейный антиген, в лунку 12-го ряда – коронавирусныи антиген. Такимже образом вносят отрицательный антиген. При количественной постановке реакции пробы титруют методом двойных разведений с 1:2 до 1:256 на ТФБР. Планшет накрывают крышкой, инкубируют в термостате 1.5-2 ч при 36-37°С и затем отмывают лунки планшета от несвязавшихся антигенов следующимобразом. Планшет освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды отмывают ТФБР, каждый раз полностью заполняя лунки буфером ивытряхивая содержимое. Затем микропанель подсушивают постукиванием по фильтровальной бумаге.

В отмытые лунки планшета с 1-го по 4-ый ряд вносят по 0.1 см3 ротавирусный иммуноферментный коньюгат, в лунки с 5-го по 8-ой ряд – диарейныйиммуноферментный коньюгат по 0.1 см3, с 9-го по 12-ый ряд – коронавирусный иммуноферментный коньюгат по 0.1 см3, разведенные как указано выше, инкубируют в термостате при 36-37°С 1.5-2 ч и вновь четырежды отмывают раствором ТФБР.

Затем в лунки вносят по 0.1 см3 субстратной смеси, которую готовят непосредственно перед использованием в реакции.

Учет результатов

Результаты реакции учитывают через 40-60 мин проводя измерение оптической плотности (О.П.) раствора в каждой лунке на спектрофотометре (ридере) с вертикальным лучом света при длине волны 405 нм.

На первом этапе вычисляют показатель О.П. каждой испытуемой и контрольной пробы.

Результаты считают достоверными, если О.П. положительного контроля ≥ 0.4, а О.П. отрицательного контроля ≤0.2.

Реакцию оценивают по отношению значения О.П. испытуемой пробы (S) к значению О.П. положительного контроля (Р) по формуле:

S/P = О.П. испытуемой пробы × 100/О.П. положительного контроля

Пробу считают положительной, если значение S/P > 48%; если значение S/P < 48% – проба считается отрицательной.

Читайте также:  Диарея рвота слабость без температуры

При отсутствии ридера проводят визуальный учет результатов реакции по появлению окраски образовавшегося реакционного продукта по сравнению с контролями от коричневого до светло-коричневого цвета:

— интенсивное коричневое окрашивание, коричневое окрашивание – положительный результат;

— светло-коричневое окрашивание – сомнительный результат;

— окрашивание отсутствует или находится на уровне отрицательного контроля – отрицательный результат.

— окрашивание отсутствует или находится на уровне отрицательного контроля – отрицательный результат.

Источник

4483869

Tritrichomonas fetus

Обнаружение генома T.fetus

КРС

100 определений

BHV450

Герпесвирус 4 тип

Обнаружение генома герпесвируса 4 типа

КРС, МРС

50 определений

CFP50

Campylobacter fetus

Обнаружение генома C.fetus

КРС, МРС

50 определений

CHLP50

Chlamydophila spp.

Обнаружение генома Chlamydophila spp.

КРС, МРС

50 определений

FQPAQ

Coxiella burnetii

Обнаружение генома Coxiella burnetii (количественное определение) 

КРС, МРС

100 определений

FQPE

Coxiella burnetii

Обнаружение генома Coxiella burnetii в фекалиях

КРС, МРС

100 определений

TFQQCHP

Coxiella burnetii & Chlamydophila spp.

Обнаружение генома Coxiella burnetii & Chlamydophila spp.

КРС, МРС

100 определений

TXP50

Toxoplasma gondii

Обнаружение генома Toxoplasma gondii

КРС, МРС

50 определений

NEOSP

Neospora caninum

Обнаружение генома Neospora caninum

КРС, МРС

50 определений

BTV1GIAH50

Блютанг

Обнаружение  генома возбудителя блютанга тип 1

КРС, МРС

50 определений

BTV4GIAH50

Блютанг

Обнаружение генома возбудителя блютанга тип 4

КРС, МРС

50 определений

BTV8GIAH50

Блютанг

Обнаружение генома возбудителя блютанга тип 8

КРС, МРС

50 определений

BTVEUG

Блютанг

Обнаружение и типизация генома возбудителя блютанга европейского типа (1,2,4,6,8, 9, 11, 16)

КРС, МРС

8 х 50 определений

BTVNS3

Блютанг

Обнаружение генома всех типов блютанга

КРС, МРС

100 определений

MPBO50

Mycoplasma bovis

Обнаружение генома Mycoplasma bovis

КРС, МРС

50 определений

EHDV50

Энзоотическая геморрагическая болезнь

Обнаружение генома возбудителя энзоотической геморрагической болезни

КРС, МРС

50 определений

PPRP50

Чума

Обнаружение генома возбудителя чумы жвачных животных

МРС

50 определений

SBVS50

Шмалленберг

Обнаружение генома возбудителя болезни Шмалленберга

МРС

50 определений

TMYCAS50

M.agalactiae & M.mycoïdes

Обнаружение геномов M.agalactiae & M.mycoïdes

МРС

50 определений

B12S

Вирусная диарея, погрничная болезнь овец

Обнаружение генома вирусной диареи, пограничной болезни овец

КРС, МРС

100 определений

BVD4ALL

Вирусная диарея (тип 1,2,3), пограничная болезнь овец (тип 1)

Обнаружение генома вирусной диареи (тип 1,2,3), пограничной болезни овец (тип 1)

КРС, МРС

100 определений

RRC50

Ротавирус, коронавирус

Обнаружение генома ротавируса и коронавируса

КРС, МРС

50 определений

MPTSA

Паратуберкулез

Обнаружение генома M. paratuberculosis

КРС, МРС

100 определений

TMPT

Паратуберкулез

Обнаружение генома Mycobacterium avium spp paratuberculosis

КРС, МРС

100 определений

PMTP50

Pasteurella multocida

Обнаружение генома токсигенных штаммов Pasteurella multocida

КРС, МРС

50 определений

TRSVPI350

Респираторно-синцитиальная инфекция, парагрипп

Обнаружение генома возбудителей респираторно-синцитиальной инфекции, парагриппа

КРС, МРС

50 определений

MTBC

Туберкулез

Обнаружение генома  M.tuberculosis

КРС, МРС

100 определений

A39235

Маститная панель:

Staphylococcus aureus

Streptococcus agalactiae

Mycoplasma bovis

Streptococcus uberis

Обнаружение геномов возбудителей мастита: Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Mycoplasma bovis, Streptococcus uberis

КРС

100 определений

A39236

Маститная панель:

Staphylococcus aureus

Streptococcus agalactiae

Mycoplasma bovis

Mycoplasma spp.

Mycoplasma alkalescens

Mycoplasma bovigenitalium

Mycoplasma californicum

Mycoplasma canadense

Обнаружение геномов возбудителей мастита: Staphylococcus aureus,  Streptococcus agalactiae, Mycoplasma bovis, Mycoplasma spp., Mycoplasma alkalescens, Mycoplasma bovigenitalium, Mycoplasma californicum,  Mycoplasma canadense

КРС

100 определений

A39227

Маститная панель:

Staphylococcus aureus

Staphylococcus spp. (включая все основные коагулазонегативные стафилококки)

Streptococcus agalactiae

Streptococcus dysgalactiae

Streptococcus uberis

Escherichia coli

Enterococcus spp. (включая E. faecalis и E. faecium )

Klebsiella oxytoca

(и / или K.pneumoniae )

Serratia marcescens

Corynebacterium bovis

Trueperella pyogenes

и / или Peptoniphilus indolicus

Ген стафилококковой β-лактамазы (ген устойчивости к пенициллину b)

Mycoplasma bovis

Mycoplasma spp.

дрожжи

Prototheca spp.

Обнаружение геномов возбудителей мастита: Staphylococcus aureus, Staphylococcus spp. (включая все основные коагулазонегативные стафилококки), Streptococcus agalactia, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis, Escherichia coli, Enterococcus spp. (включая E. faecalis и E. faecium ), Klebsiella oxytoca (и / или K. pneumoniae), Serratia marcescens, Corynebacterium bovis, Trueperella pyogenes и / или Peptoniphilus indolicus, ген стафилококковой β-лактамазы (ген устойчивости к пенициллину b), Mycop, Mycoplasma spp., дрожжи, Prototheca spp.

КРС

100 определений

SARP

Абортивная панель:

A. phagocytophilum 

герпесвирус 4 тип            

C. burnetii

C. fetus

Chlamydophila spp.

L. monocytogenes

Leptospirapathogenes

Salmonella spp

Обнаружение геномов возбудителей абортов: A. phagocytophilum, герпесвирус 4 тип, C. burnetii, C. fetus, Chlamydophila spp., L.monocytogenes, Leptospirapathogenes, Salmonella spp.

КРС, МРС

8 х 25 определений

SRPR

Респираторная панель:

Coronavirus spp.

H. somni

M. bovis

M. haemolytica

P. multocida

Парагрипп

Респираторно-синцитиальный вирус (RSV)

Обнаружение геномов возбудителей респираторных заболеваний: Coronavirus spp.,H. somni, M. bovis,       M. haemolytica, P. multocida, парагрипп, Респираторно-синцитиальный вирус

КРС, МРС

25 определений

Источник